摘要: 粪肠球菌是根管治疗失败病例的优势菌和主要致病菌。粪肠球菌具有较强的渗透能力，能够进入根管峡部、不规则区及牙本质小管内，在根管内多以生物膜的形式存在。生物膜的形成可明显提高粪肠球菌的耐药性，以致目前临床常用的根管消毒药物难以有效抑制... 展开 粪肠球菌是根管治疗失败病例的优势菌和主要致病菌。粪肠球菌具有较强的渗透能力，能够进入根管峡部、不规则区及牙本质小管内，在根管内多以生物膜的形式存在。生物膜的形成可明显提高粪肠球菌的耐药性，以致目前临床常用的根管消毒药物难以有效抑制和杀灭粪肠球菌。探寻安全有效的抗菌剂以抑制粪肠球菌生物膜形成和杀灭已形成生物膜的粪肠球菌，是提高根管治疗成功率的途径之一。纳米药物具有量子尺寸效应和表面效应等特性，其吸附位点与作用位点较多，对细菌等致病微生物有较强的抗菌作用。纳米银抗菌作用强、抗菌谱广、安全性良好，在医学领域得到广泛应用。纳米银在口腔修复及充填材料等方面的研究和应用已逐步展开，但在根管消毒中的应用研究国内外文献少见报道。纳米银溶液对粪肠球菌的有效作用浓度尚不明确，纳米银溶液能否干预粪肠球菌对牙本质的粘附从而抑制粪肠球菌生物膜的形成，对牙本质表面粪肠球菌生物膜的杀菌作用如何，这些问题均有待阐明。本实验就上述问题进行研究，为探寻新的根管消毒药物以提高根管治疗成功率提供实验依据。 目的：检测纳米银溶液对粪肠球菌的有效作用浓度，探讨纳米银溶液干预粪肠球菌对牙本质的粘附从而抑制粪肠球菌生物膜形成的作用，研究纳米银溶液对牙本质表面粪肠球菌生物膜的杀菌作用并明确其有效作用时间，为探寻新型有效的根管消毒药物以提高根管治疗成功率提供实验依据。 方法：⑴将粪肠球菌置于MBECTM P&G Assay中培养24h建立粪肠球菌感染模型，SEM观察MBECTM P&G Assay桩钉表面粪肠球菌感染情况；以次氯酸钠溶液为阳性对照，采用连续稀释法检测纳米银溶液对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小生物膜清除浓度(MBEC)。⑵制备牙本质片42个，随机分成3组，每组14个样本，分别置0.1％纳米银溶液、1.313％次氯酸钠溶液和0.9％生理盐水内浸泡30min后，于200μL粪肠球菌悬液中培养1h，每组中3个样本用于SEM观察牙本质表面形态和粪肠球菌粘附情况，11个样本用于荧光染色和荧光显微镜定量分析牙本质表面粘附的粪肠球菌数量并拍照记录，Image pro plus6.0软件分析图像，计算牙本质表面粘附的粪肠球菌总菌数、活菌数和活菌百分比。⑶制备牙本质片309个，样本随机分成3组，每组103个样本，置于粪肠球菌悬液内培养24h在牙本质表面形成生物膜，每组中3个样本用于SEM观察牙本质表面粪肠球菌生物膜表面形态，3组各余下的100个样本分别用0.1％纳米银溶液、1.313％次氯酸钠溶液和0.9％生理盐水处理，3组分别于处理0h(即处理前)、1h、6h、12h、24h时取出20个样本，10个样本用于活菌菌落计数检测牙本质片表面粪肠球菌生物膜活菌数，10个样本用于荧光染色和激光共聚焦显微镜定量分析粪肠球菌生物膜活菌/死菌空间分布并拍照记录，Fluoview软件分析生物膜扫描图像，计算生物膜各层面活菌百分比。 结果：①纳米银溶液对粪肠球菌的MIC和MBEC分别为0.006％和0.1％，次氯酸钠溶液的MIC和MBEC分别为0.656％和1.313％。②0.1％纳米银溶液组和0.9％生理盐水组牙本质表面形态清晰无破坏，1.313％次氯酸钠溶液组牙本质溶融坍塌，胶原溶解破坏。牙本质经0.1％纳米银溶液处理后，其表面粘附的粪肠球菌总菌数、活菌数和活菌百分比均低于1.313％次氯酸钠溶液组和0.9％生理盐水组(P＜0.01)。③牙本质片表面粪肠球菌生物膜经0.1％纳米银溶液处理1h、6h、12h生物膜活菌数逐渐减少，活菌数多于1.313％次氯酸钠溶液组，少于0.9％生理盐水组(P＜0.01)，0.1％纳米银溶液处理24h可完全杀灭粪肠球菌。随着0.1％纳米银溶液处理时间的延长，粪肠球菌生物膜外层、中间层和内层活菌百分比逐渐降低。0.1％纳米银溶液处理1h生物膜结构未完全解体，但生物膜中间层和内层活菌百分比分别降至(27.4+5.6)％和(20.8+4.5)％，0.1％纳米银溶液处理6h生物膜中间层和内层活菌百分比降至(2.0±0.9)％和(1.8±0.9)％。0.1％纳米银溶液处理12h和24h，生物膜各层活菌百分比与1.313％次氯酸钠溶液组无显著性差异(P＞0.05)，均少于0.9％生理盐水组(P＜0.01)。 结论：⑴纳米银溶液对粪肠球菌有较强的抗菌作用，0.006％的纳米银溶液可抑制粪肠球菌生长，0.1％纳米银溶液可杀灭生物膜状态粪肠球菌。⑵0.1％纳米银溶液可有效减少粪肠球菌对牙本质的粘附且对牙本质表面形态无明显破坏，推测应用纳米银溶液冲洗根管可减少粪肠球菌对根管牙本质的粘附，抑制根管内粪肠球菌生物膜的形成。⑶0.1％纳米银溶液可在生物膜未完全解体的情况下杀灭牙本质表面粪肠球菌生物膜深层细菌，提示纳米银溶液对粪肠球菌生物膜有较强的渗透能力和杀菌作用，其杀菌作用随处理时间的延长而增强，至24h可完全杀灭粪肠球菌，表明应用0.1％纳米银溶液作为根管消毒药物有望提高根管消毒效果，其作用时间以24h以上为佳。 收起