摘要: 前列腺癌是危害男性健康常见的恶性肿瘤，在美国前列腺癌的发病率已经超过肺癌，成为危害男性健康第一位的肿瘤.中国的前列腺癌发病率远远低于欧美国家，但近年来也呈现上升趋势。本研究通过特异性扩增前列腺癌相关抗原基因，进行真核表达，为建立前列... 展开 前列腺癌是危害男性健康常见的恶性肿瘤，在美国前列腺癌的发病率已经超过肺癌，成为危害男性健康第一位的肿瘤.中国的前列腺癌发病率远远低于欧美国家，但近年来也呈现上升趋势。本研究通过特异性扩增前列腺癌相关抗原基因，进行真核表达，为建立前列腺癌疫苗研究所需要的转基因细胞模型及动物模型奠定了基础。 目的：从人前列腺癌细胞系中特异性扩增前列腺癌相关抗原基因，包括前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)，构建真核表达载体，进行真核表达。 方法：通过RT-PCR的方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中特异性扩增PSCA、PAP、PSMA基因，连接到真核表达载体pIRES-neo中，构建真核表达质粒pIRES-neo-PSCA-His，pIRES-neo-PAP-His，pIRES-neo-PSMA-His.脂质体法瞬时转染COS-7细胞，应用流式细胞术检测前列腺相关抗原的蛋白表达。随后选择质粒pIRES-neo-PSCA-His，脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞，通过G418初步加压筛选，用RT-PCR及免疫荧光和流式细胞术分别检测B16细胞中人PSCA基因的mRNA转录和蛋白表达。 结果：特异性扩增得到大小与人PSCA、PAP、PSMA基因相符的基因片段，序列测定证实与GenBank上登录的序列一致；成功构建真核表达质粒并转染COS-7细胞，证实质粒可以真核表达。pIRES-neo-PSCA-His质粒成功转染B16细胞并进行初步加压筛选，检测证实质粒可以在B16细胞中表达。 结论：特异性扩增出前列腺癌相关抗原基因，成功构建真核表达载体并验证其真核表达。通过G418的初步加压筛选证实所构建的真核表达质粒可以用于下一步转基因细胞系的建立，为前列腺癌疫苗的功能评价研究奠定了基础。 收起