摘要: 目的：本研究以外源性AGEs为损伤因子，在体外培养的大鼠VSMCs和在体大鼠颈动脉球囊损伤模型上，观察NHE1选择性抑制剂cariporide对AGEs诱导的VSMCs增殖和球囊损伤后内膜增生的影响，旨在探讨AGEs促VSMCs增殖的细胞内信号机制。 方法：(1)体外培养... 展开 目的：本研究以外源性AGEs为损伤因子，在体外培养的大鼠VSMCs和在体大鼠颈动脉球囊损伤模型上，观察NHE1选择性抑制剂cariporide对AGEs诱导的VSMCs增殖和球囊损伤后内膜增生的影响，旨在探讨AGEs促VSMCs增殖的细胞内信号机制。 方法：(1)体外培养的VSMCs实验：采用组织贴块法原代培养大鼠VSMCs，用MTT比色法所测得的细胞吸光度值及考马斯亮蓝法测得的细胞总蛋白含量来反映细胞增殖情况，利用BCECF及Fura-2荧光染料通过荧光分光光度计分别检测NHE1活性、细胞内的pH值及[Ca2+]；浓度，RT-PCR检测NHE1 mRNA表达量。(2)在体动物实验：用球囊损伤大鼠颈总动脉造模，取标本，HE染色，进行形态学观察，并应用图像分析系统进行图像分析计算内膜面积，中膜面积及内膜/中膜面积比。 结果： VSMCs实验：(1)不同浓度的AGEs(1，5，10，15μg/ml)与VSMCs共孵育24h后，细胞MTT光吸收值及总蛋白水平与正常对照组相比明显升高(P<0.05或P<0.01)，AGEs浓度为10μg/ml时作用最明显，说明AGEs可以刺激体外的VSMCs增殖；(2)Cariporide呈浓度依赖性的抑制AGEs诱导的平滑肌细胞的增殖，同时AGEs受体阻滞剂anti-RAGE(5μg/ml)和MAPK特异性抑制剂PD98059(25μmaol/L)亦能明显地抑制由AGEs诱导的细胞吸光度值和总蛋白浓度的升高；(3)AGEs可以显著增高细胞内Ca2+水平，预先使用cariporide、anti-RAGE、PD98059均可以显著抑制由AGEs诱导的细胞内Ca2+水平的升高；(4)AGEs刺激后可以引起细胞内pH值升高，与正常对照组比，差异显著(P<0.01)。加入cariporide预处理后，cariporide能明显抑制AGEs引起的pH值升高；(5)AGEs浓度依赖性的增强NHE1的活性，预先使用anti-RAGE，PD98059，转录抑制剂放线菌素-D 10nmol/L和蛋白合成抑制剂放线菌酮10μmol/L均能显著抑制AGEs诱导的NHE1的活性升高；RT-PCR结果显示AGEs可以促进NHE1的mRNA表达增多，与正常组比较有显著性差异。在体动物实验：(1)正常血管腔内膜可见一层扁平的内皮细胞覆盖，血管各层分界清楚，未见新生内膜增殖。单纯球囊损伤后，可见血管腔内新生内膜增生明显，血管腔狭窄；(2)单纯AGEs注射未见大鼠血管内膜增生，球囊损伤后，内膜明显增生，与正常血管球囊损伤后的新生内膜相比有显著性差异(0.912±0.024mm2 VS 0.334±0.014mm2，P<0.01)，中膜面积无明显差异(P>0.05)，此结果说明AGEs能加速球囊损伤后新内膜的形成。(3)给予cariporide(0.1、10 mg/kg)治疗后能明显减少AGEs损伤组新生内膜的面积(P<0.01)。 结论：1 AGEs能明显促进VSMCs的增殖和血管内膜损伤后新内膜的形成；2 Cariporide能显著抑制AGEs诱导的VSMCs的增殖和血管内膜损伤后的新内膜的形成：3 AGEs诱导VSMCs增殖的细胞内信号通路可能与AGEs激活受体RAGE，引起MAPK活化，继而激活细胞膜上的NHE1，增加细胞内Ca2+浓度有关；4 NHE1抑制剂可能通过抑制AGEs促VSMCs增殖的作用而降低糖尿病血管并发症和冠状血管成形术后再狭窄的发生率。 收起