摘要: 膀胱癌是我国泌尿外科最常见的肿瘤，占全身恶性肿瘤的3。2%，其中来源于尿路上皮的肿瘤占95%以上，是一种直接威胁患者生存的疾病。膀胱癌的治疗以手术为主，但术后容易复发，且肿瘤的恶性程度、浸润能力随着复发次数的增加往往也随之增强。膀胱灌注... 展开 膀胱癌是我国泌尿外科最常见的肿瘤，占全身恶性肿瘤的3。2%，其中来源于尿路上皮的肿瘤占95%以上，是一种直接威胁患者生存的疾病。膀胱癌的治疗以手术为主，但术后容易复发，且肿瘤的恶性程度、浸润能力随着复发次数的增加往往也随之增强。膀胱灌注治疗虽然能够降低复发，延长生存时间，但是一旦疾病发展为肌层浸润性膀胱癌以后，仅有10%～20%患者可望获得长期生存[1]。然而目前为止，导致膀胱癌发生与进展的分子遗传学因素尚未完全清楚，因此，从膀胱癌的发病机理出发，在分子水平对膀胱癌的发生发展进行研究，对于膀胱癌的诊治及预防具有重要的意义。 microRNAs(miRNAs)是一类新发现的非编码小分子RNA，长约19～25个核苷酸，通常在转录后水平调控基因表达。成熟miRNAs通过与靶基因mRNA的3'UTR完全或不完全互补配对，降解靶基因mRNA或阻遏其转录后翻译[2-4]。近年来研究表明miRNAs可能是一类进化上相对保守的RNA分子，在细胞的分化、增殖和凋亡，个体发育，机体代谢以及病毒感染中都具有重要的作用，miRNAs表达丰度和方式的多样性，使其可能作为蛋白质编码mRNA的强有力的调节子[5]。新近研究表明，肿瘤细胞与正常组织来源细胞间miRNAs表达谱具有明显的差异，且多数miRNAs基因都位于肿瘤形成相关脆性基因位点，这就提示miRNAs在肿瘤的形成中可能扮演着重要的角色，研究与肿瘤相关的miRNAs可能为肿瘤的预防和治疗开辟新的方向[6-8]。 因此，本课题旨在对miRNAs在膀胱移行上皮癌与正常膀胱上皮组织的表达谱芯片进行分析，就差异表达比较明显的microRNA-143(miR-143)在膀胱癌中的低表达进行进一步的鉴定，并探讨膀胱癌中miR-143的低表达在膀胱癌发生发展中可能存在的作用机理及临床意义，为膀胱癌在基因水平的诊治提供理论基础与实验依据。首先，在对miR-143在膀胱癌中的表达的鉴定及临床意义分析方面，我们对2张miKNAs的表达谱芯片进行分析，发现miR-143在正常膀胱上皮组织中高表达而在膀胱移行上皮癌中却呈现低表达的特点，二者的差异表达高达17.7倍。为了对这一结果进行进一步的确认，我们运用Northern blotting技术检测了9例膀胱癌组织、6例正常膀胱组织及膀胱癌细胞株EJ、T24中miR-143的表达情况．结果显示6例正常膀胱组织中miR-143高表达，而9例膀胱癌组织以及EJ、T24细胞株中。miR-143不表达或者低表达。在这一结果基础上，我们为了进一步探讨miR-143在膀胱癌中低表达与临床病理的关系，我们运用real-time PCR技术对28例不同分期分级的膀胱移行上皮癌组织及2例正常膀胱上皮组织中miR-143的表达进行了定量检测，结果显示所有癌组织中miR-143都低表达，但很遗憾并没有发现其与膀胱癌的分期分级存在显著的相关性。 其次，在探讨膀胱癌中miR-143功能学方面，我们将miR-143成熟体、阴性对照RNA转染膀胱癌EJ细胞株。转染6h后，荧光显微镜下即能观察到带绿色荧光的细胞，转染率90％以上。转染48h后，收集细胞的总RNA及蛋白。进一步通过Real-time PCR技术验证了转染的成功，并通过RT-PCR，Westem blot技术观察了miR-143的潜在靶基因RAS癌基因编码蛋白RAS及mRNA的变化。结果显示，转染miR-143成熟体的膀胱癌EJ细胞中RAS蛋白的表达水平明显降低，H-RAS、K-RAS mRNA无明显变化；而对照组中RAS蛋白、H-RAS及K-RAS mRNA均无明显变化。对文献报道的miR-143另一潜在靶基因ERK-5，我们发现转染miR-143成熟体前后膀胱癌EJ细胞中ERK-5蛋白变化不明显。 综上所述，我们运用Northern blotting、real-time PCR技术证实了miR-143在膀胱癌中较正常膀胱上皮中显著降低，且miR-143可能通过作用于潜在靶基因RAS，抑制其蛋白的翻译并阻止其传导通路的活化，从而抑制肿瘤形成。这些研究成果不仅为膀胱癌的发病机理提供了新的研究途径，而且为临床上膀胱癌的诊断以及miRNAs作为膀胱癌基因治疗的新策略奠定了坚实的基础。 收起