摘要: 目的：研究我国成人急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)患者及健康汉族人群巯嘌呤甲基转移酶(thiopurinemethyltransferase，TPMT)基因多态性；建立一种简易的HPLC方法检测血红细胞TPMT的活性，并研究了健康汉族成年人和成人ALL患者... 展开 目的：研究我国成人急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)患者及健康汉族人群巯嘌呤甲基转移酶(thiopurinemethyltransferase，TPMT)基因多态性；建立一种简易的HPLC方法检测血红细胞TPMT的活性，并研究了健康汉族成年人和成人ALL患者TPMT活性分布；通过检测成人ALL患者6-巯基嘌呤(6-mercatopurine,6-MP)维持治疗中TPMT活性和基因型，临床观察药物毒性并调整药物剂量，分析该检测对6-MP化疗个体化的临床意义。 方法：第一部分：从78例成人ALL患者和154例健康汉族人外周血提取白细胞基因组DNA，采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)和PCR结合限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术对TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的等位基因频率进行分析。第二部分：以非放射性S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine，SAM)为甲基供体，在体外红细胞裂解液中完成TPMT催化下的6-MP向6-甲基巯基嘌呤(6-methylmercatopurine，6-MeMP)的甲基化转变。孵育结束时，6-MeMP经乙酸苯汞混和物抽提。采用高效液相色谱法分析。TPMT的活性用37℃时每小时每毫升红细胞生成多少纳摩尔的6-MeMP来表示。第三部分：通过第一、二部分建立的方法检测20例成人ALL患者初诊时和6-MP维持治疗中TPMT活性和基因型，临床观察药物毒性并调整药物剂量，分析TPMT遗传多态性对成人急淋白血病巯嘌呤维持化疗耐受性的影响。 结果：第一部分：在成人ALL患者和健康汉族人中仅检测到6例TPMT*3C杂合子，没有检到TPMT*2、TPMT*3A和TPMT*3B。成人ALL患者TPMT总的突变型等位基因频率(1.28％)与健康汉族人群(1.30％)相近。第二部分：HPLC方法测定6-MeMP线性范围为20-1280μg·L-1(r=0.9995，n=7)，最低检测浓度0.01mg·L-1；高、中、低三种浓度的平均回收率为92.3％，日内及日间变异均＜8％。健康汉族成人和成人ALL患者TPMT活性均呈正态分布，前者活性范围为5.12～22.41units/mlpRBC，平均活性为(13.46±2.90)units/mlpRBC；后者活性范围为8.13～20.86units/mlpRBC，平均活性为(13.31±2.55)units/mlpRBC。男性和女性相比，TPMT活性没有显著性差异。健康汉族成人与成人ALL患者服用6-MP前TPMT活性相比没有显著性差异。而TPMT*3C杂合子TPMT平均活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)纯合子，差异有显著性。第三部分：20名成人ALL患者中有2例酶活性较低的TPMT*3C杂合子，未发现其它突变基因型。服用6-MP维持治疗(2周后)的成人ALL患者TPMT活性(15.96±3.44units/mlpRBC)显著高于初诊时(13.20±2.96units/mlpRBC)。20名患者中有2人因为血液毒性和肝毒性不耐受标准剂量的6-MP维持治疗。 结论：1.TPMT*3C可能是中国成人ALL和健康汉族人群最主要的突变型等位基因；2.TPMT活性在健康汉族成人和成人ALL患者均呈正态分布，TPMT基因型和表型存在相关性，TPMT*3C杂合子平均酶活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)纯合子；3.成人ALL患者服用6-MP维持治疗(2周后)TPMT活性高于初诊时；在开始包含巯嘌呤类药物的化疗方案治疗前，给予检测TPMT基因型和活性会对汉族成人ALL患者临床治疗有益。 收起