摘要: 中药复方配伍规律研究，是目前亟待解决的技术难题，从复方最小单位“药对”入手研究配伍规律，符合从易到难的研究思路，是复方研究的基础所在。本课题以仲景名方“桔梗汤”(后世多称为“甘桔汤”)主要物质基础——甘草皂苷和桔梗皂苷为具体研究对象，以两者... 展开 中药复方配伍规律研究，是目前亟待解决的技术难题，从复方最小单位“药对”入手研究配伍规律，符合从易到难的研究思路，是复方研究的基础所在。本课题以仲景名方“桔梗汤”(后世多称为“甘桔汤”)主要物质基础——甘草皂苷和桔梗皂苷为具体研究对象，以两者共同药效——抗炎作用为主要考查指标，祛痰作用为辅助，围绕两者合用的毒性变化、药效维持时间以及药效强度展开，采用几种国内外成熟的药物相互作用评价方法—金氏Q值法、改良的等高线法以及中效法，配合已开发的相应软件，对两者合并使用结果的性质进行评价，以期达到以下目的：一则通过合用性质定量化，从而揭示甘草皂苷与桔梗皂苷合用的内在联系，阐明配伍优于单方的内在原因，为临床应用提供科学的用药依据；二则寻找到适合中药部位合用研究的设计和评价方法，并探索中药“药对”配伍规律的研究思路与方法，为进一步研究中药复方提供可能。 研究结果如下：1毒性拮抗研究动物预先给予一定剂量甘草皂苷(我们称其为“甘草化”过程)，可明显降低给予致死量桔梗皂苷后动物的死亡率(死亡率曲线明显右移)，桔梗皂苷LD50显著提高。提示，中药解毒研究应当采用适合中药临床用药特点的新方法。 2时间协同研究小鼠气管酚红排泌、二甲苯致耳肿胀以及PLA2致足跖肿胀模型中，甘草皂苷与桔梗皂苷合用可明显延长药效持续时间，体现“时间协同”特点。金氏Q值法评价“时间协同”出现时间点的合用性质，显示出协同或相加的结果。 3强度协同研究3.1体内研究甘草皂苷、桔梗皂苷以及两者合用在一定剂量范围内皆能抑制PLA2所致的小鼠足跖肿胀，并呈剂量依赖关系。采用金氏Q值、改良的等高线法以及中效法对结果进行评价，可以得出，三种方法的评价结果趋势相同，随着剂量增加，合用效果由相加转为拮抗，但在不同效应点下却有出入，改良等高线法和中效法在有效剂量范围内始终表现为相加作用。 3.2体外研究甘草皂苷、桔梗皂苷以及两者合用皆能抑制LPS刺激的RAW264.7细胞产生NO，提示为两者抗炎机制之一。因桔梗皂苷抑制作用无规律量效关系可循，所以采用“点对线”研究思路，固定桔梗皂苷剂量，与不同剂量甘草皂苷合用。金氏Q值法评价结果显示为，随着剂量增加，从协同转入相加。 为阐明甘草皂苷和桔梗皂苷可能的抗炎机制，我们建立了一种准确、价廉、可操作性强的体外PLA2抑制剂筛选方法。甘草皂苷、桔梗皂苷以及合用皆可从体外抑制PLA2活性，并显示出剂量依赖关系，由于桔梗皂苷线性范围狭窄，我们还获取了桔梗皂苷精制物的量效曲线。金氏Q值法、改良的等高线法评价无固定配比的甘草皂苷与桔梗皂苷合用性质，结果一致，表现为协同；金氏Q值法、改良的等高线法和中效法对固定配比的甘草皂苷与桔梗皂苷精制物合用进行评价，金氏Q值法、改良的等高线法结果皆表现为相加，而中效法则表现为，随着效应增加，从相加(效应＜30％)转入拮抗。 甘草皂苷和桔梗皂苷能够显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞产生PGE2，以及减少COX-2的生成，但对COX-2生成后的活性影响较小，提示，甘草皂苷与桔梗皂苷抗炎的机制与其抑制COX-2生成从而减少PGE2产生有关。该节采用“点对线”思路，应用金氏Q值法对PGE2和COX-2生成结果进行评价，显示，仅在500μg/ml甘草皂苷与0.5μg/ml桔梗皂苷的合用时表现为相加作用，其余剂量表现出拮抗。 结论“药对”药效的最大发挥与剂量有关，与配伍比例有关，与作用环节，尤其是机制环节上发生的相互作用有关。中药复方是各药味相互作用优化的结果，综合毒性拮抗、时间协同以及强度协同结果，为达到三方面的协调统一，尤其是在减少毒性的前提下，合用评价“相加”的结果揭示了配伍优于单方的内在本质。 中药配伍毒性拮抗、时间协同以及强度协同评价方法的选用，应在全面分析评价方法原理的情况下，采用适合研究指标的方法，做到因地制宜。同时，应该采用多种评价方法共同进行评价，以期获得药味合用最接近真实状况的相互作用性质。 收起