摘要: 目的：探讨TRAILR在肝癌细胞HepG2和HepG2/ADM中的表达差异，TRAIL联合阿霉素对肝癌耐药株HepG2/ADM的治疗作用。 方法：通过浓度递增法用阿霉素处理人肝癌细胞株HepG2获得肝癌耐药株HepG2/ADM。并通过MTT方法鉴定耐药株的耐药性。RT-PCR、Western... 展开 目的：探讨TRAILR在肝癌细胞HepG2和HepG2/ADM中的表达差异，TRAIL联合阿霉素对肝癌耐药株HepG2/ADM的治疗作用。 方法：通过浓度递增法用阿霉素处理人肝癌细胞株HepG2获得肝癌耐药株HepG2/ADM。并通过MTT方法鉴定耐药株的耐药性。RT-PCR、WesternBlot和免疫组化比较肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2的bcl-2、MDR1及TRAIL受体的mRNA和蛋白表达。采用AnnexinV-FITC-PI双染色流式细胞仪测TRAIL对肝癌耐药株HepG2/ADM的凋亡诱导作用。 应用可溶型TRAIL真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL。通过脂质体Lipofectamine2000介导转染质粒入HepG2/ADM。通过RT-PCR和WesternBolt证实转染的HepG2/ADM有sTRAIL的mRNA和蛋白的表达后，用MTT方法和AnnexinV-FITC-PI染色流式细胞仪检测单纯TRAIL处理和联合阿霉素处理HepG2/ADM的生长抑制率和凋亡率。并用共聚焦显微镜观察处理后细胞凋亡的形态。 分别用阿霉素和其联合TRAIL应用处理肝癌耐药株后，通过RT-PCR、WesternBlot和免疫组化比较肝癌耐药株HepG2/ADMHepG2的DR4、DR5受体及bcl-2、NF-κB的mRNA和蛋白表达。应用Rhodamine123染色通过流式细胞仪检测细胞跨膜电位。应用分光光度仪检测细胞的capase8、caspase3的表达。 结果：通过浓度递增法用阿霉素处理人肝癌细胞株HepG2成功获得肝癌耐药株HepG2/ADM。肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代比较bcl-2、MDRl表达明显增强，四种TRAIL受体两者表达无明显差异。TRAIL对肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代诱导的凋亡率无显著性差异。sTRAIL转染成功。用MTT测HepG2/ADM抑制率阿霉素处理组40.99±10.56％；TRAIL处理组28.72±7.64％；合用组58.42±8.35％；联合后抑制率有显著差异。凋亡检测为阿霉素处理组18.8±1.23％；TRAIL处理组14.38±1.02％；合用组49.74±1.85％。联合TRAIL与阿霉素能明显增加HepG2/ADM细胞的凋亡率。分别用阿霉素和其联合TRAIL应用处理肝癌耐药株后，两者间的DR4、DR5受体及bcl-2、NF-κB表达无明显差异。阿霉素联合TRAIL处理HepG2/ADM细胞能更加显著的降低跨膜电位、激活caspase8、caspase3。 结论： 1.肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2都存在DR4、DR5受体和DcR1、DcR2受体表达。表达无显著性差异。是TRAIL治疗肝癌耐药株的基础。同时单纯TRAIL治疗对耐药株作用与亲代细胞作用相仿，受HepG2/ADM耐药性的影响小。故TRAIL处理肝癌耐药株有优势。 2.TRAIL联合阿霉素能明显增加肝癌耐药株HepG2/ADM的凋亡。 3.TRAIL联合阿霉素可能通过诱导凋亡的作用叠加而突破凋亡的域值，而非对DR4、DR5受体及bcl-2、NF-κB的调节来增加凋亡。 收起