摘要: 龋病是在以细菌为主的多种因素影响下，牙体硬组织发生的进行性破坏的一种疾病。龋病的预防一直是国内外的研究重点。现有的龋病预防措施都存在一些不足。我国天然药物资源丰富，历史悠久，有着巨大的开发潜力。本课题组在国内外首次开展中药防龋的系... 展开 龋病是在以细菌为主的多种因素影响下，牙体硬组织发生的进行性破坏的一种疾病。龋病的预防一直是国内外的研究重点。现有的龋病预防措施都存在一些不足。我国天然药物资源丰富，历史悠久，有着巨大的开发潜力。本课题组在国内外首次开展中药防龋的系列研究，前期研究通过对多味中药的抗龋筛选实验发现五倍子(GallaChinesis)具有与化学制剂洗必泰、氟化钠相近的抗龋效能。在不影响各实验菌株生长的较低浓度下也可有效抑制细菌产酸，产胞外多糖及早期对羟磷灰石的黏附等致龋毒力因子，具有抑制致龋菌生长、调节细菌代谢的作用。在体外生物膜模型中，五倍子水提物具有抑制细菌对羟磷灰石表面的黏附及牙体硬组织脱矿的作用，并与氟化钠的作用相当。但是对于五倍子防龋的活性成分及其防龋机制还缺乏进一步的认识，因此，本研究拟通过化学方法，结合体外系列筛选实验和口腔生物膜模型，对天然药物五倍子防龋有效部位(活性成分)进行分离追踪，综合评估其防龋效能；筛选出防龋有效成分，并对其进行结构鉴定。为进一步研究五倍子防龋有效成分的作用机制提供实验基础 方法在前期研究的基础上，利用溶剂提取法提取五倍子生药中的多酚类物质，(前期研究证实此类提取物具有抗龋活性)。并对五倍子多酚性化合物以葡聚糖凝胶sephadexLH-20(AmershamBiosiences安玛西亚上海公司)为分离材料进一步分离，依次以去离子水1500ml、30％乙醇1500ml、50％丙酮1500ml、丙酮1500ml梯度洗脱。得到不同的五倍子提取物。结合体外防龋筛选实验，测试样品对口腔细菌生长、产酸、产糖、黏附的作用及其对釉质脱矿影响，以此对五倍子提取物中的有效成分进行筛选追踪，利用红外光谱，核磁共振，高效液相色谱等技术鉴定筛选得到活性成分的化学组成及结构；在人工口腔生物膜模型中定植4种口腔常驻菌(变形链球菌，血链球菌，乳杆菌，内氏放线菌)于发酵罐中，在稳定的培养条件下进行连续培养，待细菌构成比达到稳定后，将细菌泵入恒流培养室，在羟磷灰石片、玻片及牙釉质块上，形成人工菌斑生物膜；通过对模型恒流培养室中定时给予含药物化学组分的蔗糖溶液(以同浓度的蔗糖溶液与含228ppm氟化钠的蔗糖溶液分别作为阴性与阳性对照)，观察实验筛选出的活性成分对实验生物膜表面形态，细菌构成，细胞外水不溶性多糖的形成及釉质结构的影响，并连续观察培养系统中的pH动态变化。以此对所筛选的五倍子活性成分的抑龋效能进行进一步评估，观察其对实验生物膜的影响。 结果1.经分离得到五倍子多酚性化合物和五倍子A、B、C、D，筛选出五倍子多酚性化合物和五倍子B为五倍子抗龋的活性成分，对五倍子B进一步分离得到化合物1和化合物2，经结构鉴定分别为没食子酸和没食子酸甲酯。2.体外防龋筛选实验发现五倍子多酚性化合物和五倍子B的抑龋能力较强，即使在不影响各实验菌株生长的低浓度下也可有效抑制实验菌株的生长，利用蔗糖产酸，及实验菌株对唾液包被的羟磷灰石表面的黏附，并能都在体外实验中抑制有机酸造成的釉质脱矿。在生物膜模型中证明五倍子多酚性化合物和五倍子B能显著减少致龋菌在羟磷灰石片上的黏附，及胞外基质的合成。因此，综合评价五倍子B与五倍子多酚性化合物都具有较强的防龋功效，五倍子多酚性化合物的作用强于五倍子B。 结论通过对天然药物五倍子的进一步分离纯化，结合活性筛选实验，本研究成功地分离到五倍子防龋的活性成分——五倍子多酚性化合物和五倍子B，并在体外生物膜模型中验证了其防龋效能。实验结果表明五倍子多酚性化合物和五倍子B都具有较好的防龋效果。研究结果为进一步阐明五倍子防龋的物质基础及药理机制提供了理论依据和实验基础；并为下一步寻找五倍子预防龋病的先导化合物奠定基础。 收起