摘要: 由于各种原因导致的骨缺损和坏死的治疗是需要多学科协作的临床难题.该实验改进取材方法,体外分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);体外矿化诱导MSCs,为骨组织工程提供种子细胞.利用自体骨髓间充质干细胞和珊瑚羟基磷... 展开 由于各种原因导致的骨缺损和坏死的治疗是需要多学科协作的临床难题.该实验改进取材方法,体外分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);体外矿化诱导MSCs,为骨组织工程提供种子细胞.利用自体骨髓间充质干细胞和珊瑚羟基磷灰石(Coral Hydroxyapatite,CHA)、羟基磷灰石磷酸三钙(Hydroxyapatite/Tricalcium Phosphate,HA/TCP)、聚乳酸聚乙醇酸共聚物(Polylacticcoglycollic Acid,PLGA)和藻酸盐凝胶四种支架材料复合制成组织工程化骨,并采用组织工程化骨修复大鼠颅骨极量缺损以观察并比较此四种组织工程化骨的骨修复效果.以藻酸盐凝胶为支架材料,以经体外软骨向诱导的大鼠骨髓间充质干细胞为种子细胞,构建组织工程化软骨,植入大鼠体内异位成软骨.利用聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)和藻酸盐凝胶作为支架材料,与大鼠骨髓间充质干细胞复合制成组织工程化骨,并探讨和比较其在裸鼠体内异位成骨的能力.采用改进取材法取大鼠胫骨,冲取骨髓,密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增并进行常规矿化诱导.采用改进取材法与密度梯度离心及贴壁培养法相结合的分离培养方法能大幅度降低污细胞污染率及实验动物的死亡率、有效分离纯化大鼠骨髓MSCs.矿化诱导对细胞的增殖有一定抑制作用;经矿化诱导的大鼠骨髓间充质干细胞具有成骨细胞的表征.采用组织工程化骨修复大鼠颅骨极量缺损,X光片检测证实藻酸盐凝胶和PLGA组在缺损区均有钙化密度增高表现,其中以藻酸盐凝胶组密度升高更为显著.组织学、免疫组织化学检测均显示实验组内各种复合物内均有新骨形成,其中CHA和藻酸盐凝胶两组所成的新骨量较多.采用组织工程化软骨植入大鼠背部皮下,术后4周未见软骨形成,术后8周有明显的大量软骨形成.常规组织学切片(HE染色及奥新蓝特染)后发现有大量软骨形成.软骨内仍可见细胞团,软骨细胞周围基质丰富,藻酸盐凝胶降解明显.Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交均为阳性,从而在蛋白水平和分子水平上证明软骨形成.采用组织工程化骨裸鼠体内异位成骨,术后8周藻酸盐凝胶内有大量的成熟骨组织形成,PLGA复合体内虽也有骨组织形成,但形成量明显较藻酸盐凝胶少. 收起