摘要: 该课题克隆了杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶(DCA1)和碳酸酐酶(CA1)基因的启动子,并对其功能进行了分析.结果表明,DCA1基因启动子可驱使外源的抗除草剂基因(bar)在杜氏盐藻细胞中稳定表达,CA1基因启动子可驱使外源的bar基因在杜氏盐藻细胞中瞬时表达.而且DCA... 展开 该课题克隆了杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶(DCA1)和碳酸酐酶(CA1)基因的启动子,并对其功能进行了分析.结果表明,DCA1基因启动子可驱使外源的抗除草剂基因(bar)在杜氏盐藻细胞中稳定表达,CA1基因启动子可驱使外源的bar基因在杜氏盐藻细胞中瞬时表达.而且DCA1基因启动子还受氯化钠浓度梯度调控,是一种新的高渗休克诱导性启动子.结论:1通过巢式PCR和跨内含子PCR方法,首次克隆得到了DCA1和CA1基因的5'上游区、3'下游区和跨内含子基因组DNA序列,而5'上游区序列可能还是杜氏盐藻两种新的碳酸酐酶基因的启动子区序列.2基因组步行方法(巢式PCR)是寻找已知cDNA周围未知基因组DNA序列的较好方法.3首次克隆得到的DCA1基因启动子可能是一种活性高、安全性好的高渗诱导性启动子;4杜氏盐藻DCA1和DC1基因启动子区的GT高度重复序列,可能与杜氏盐藻高度耐盐的分子机制有关.5在氦气压力为100psi条件下微弹轰击2次,可能是基因枪方法转化杜氏盐藻的较好转化条件. 收起