摘要: 葡萄糖淀粉酶是一种重要的工业用酶,在食品发酵、轻工业行业中应用广泛.毕赤酵母是目前常用的真核表达系统,利用强大的醇氧化酶(AOX)启动子能使外源基因得到高效表达,还能将外源蛋白进行正确的折叠、修饰并分泌到胞外,实现高密度发酵.该论文主要是通过... 展开 葡萄糖淀粉酶是一种重要的工业用酶,在食品发酵、轻工业行业中应用广泛.毕赤酵母是目前常用的真核表达系统,利用强大的醇氧化酶(AOX)启动子能使外源基因得到高效表达,还能将外源蛋白进行正确的折叠、修饰并分泌到胞外,实现高密度发酵.该论文主要是通过基因工程手段,对毕赤酵母能否高效表达葡萄糖淀粉酶基因进行探索.在摇瓶水平模拟分批发酵,对培养基条件进行初步的摸索,找到毕赤酵母最佳的生长和表达条件范围,得到最佳种子培养基为添加5ml/L PTM1的BMGY培养基;生长时期甘油浓度为4%,硫酸铵浓度为2.5mg/ml--10mg/ml,表达时期甲醇浓度为1%--2%,硫酸铵浓度为10mg/ml,添加0.1%亚油酸对外源基因的表达有一定的促进作用.综合上述条件,以添加5mg/LPTM1的BMGY培养基为种子液,按10%的比例接种于30升的反应器中,利用28%的氨水调节pH稳定在6.0左右,诱导表达2天后,添加0.1%亚油酸,继续诱导1天后放罐,菌体密度达到OD<,600>256,表达水平为157.4mg/L,比摇瓶水平提高4倍. 收起