摘要: 目的：观察缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)和缺血后处理(ischemic postconditioning，IPO)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨他们各自的作用机制及是否具有叠加作用；进一步探讨IPC、IP0心肌保护作用机制与蛋白激酶C0c(PKCα)之... 展开 目的：观察缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)和缺血后处理(ischemic postconditioning，IPO)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨他们各自的作用机制及是否具有叠加作用；进一步探讨IPC、IP0心肌保护作用机制与蛋白激酶C0c(PKCα)之间的关系。 方法：选择50只250-300克实验用S-D大鼠，随机分成5组：NC组(空白对照组，n=10)，开胸，穿线但不阻断；IR组(缺血再灌注损伤组，n=10)，阻断冠状动脉左前降支(1eR anterior descending，LAD)40分钟，再灌注120分钟；IPC组(缺血预处理组，n=10)，三次短暂组断LAD(闭塞5分钟，再灌注10分钟，循环三次)，余同IR组；IPO组(缺血后处理组，n=10)，阻断LAD40分钟，再通30秒，阻断30秒，重复三次，再灌注120分钟；IPC+IPO组(缺血预处理+缺血后处理组，n=10)，即阻断LAD5分钟，再灌注10分钟，循环三次，再次阻断LAD40分钟，再通30秒，阻断30秒，循环三次后再灌注120分钟。所有动物术前禁食、水3小时，采取全麻，气管切开，呼吸机辅助，胸部正中切口。所有动物第一次阻断LAD前分别给予肝素500单位/kg，以防止血栓形成。观测指标：①CK-MB测定：各组于冠状动脉阻断前、再灌注30分钟、60分钟、120分钟分别从右心耳取血1毫升，在全自动生化分析仪上测定CK-MB。②心肌梗死面积测定：取血毕，速取心脏，原位阻断LAD，经主动脉逆灌Even’s蓝，分离蓝染和无蓝染区，无蓝染区经冷冻、切片后用TTC法染色，最后于电子天平上称重、记录数据。③SOD、MDA测定：再灌注120分钟末打开腹腔，从下腔静脉取血，分离血清，-20℃保存待测。④PKCα测定：取心肌标本4％多聚甲醛固定，切片用免疫组化染色，计算PKCα阳性细胞数及阳性细胞占总细胞数的百分比。⑤心律失常发生率：各组动物均常规检测心电图，计算再灌注损伤后心律失常(室早、室速、室颤等)发生情况。⑥形态学观测指标：再灌注末取左室心肌适量大小固定后分别行光镜和电镜观察。 结果：①CK-MB测定结果表明：CK-MB基础水平在各组并无差别。在再灌注30分钟、60分钟、120分钟血CK-MB水平在IR组、IPC组、IPO组及IPC+IPO组均随着时间延长而显著升高，表明各组均存在缺血再灌注损伤。但各时间点IPC组、IPO组、IPC+IPO组低于IR组(P<0.01)，提示IPC、IPO和IPC+IPO均具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。而IPC、IPO、IPC+IPO三组之间无明显差别。②心肌梗死面积结果表明：IPC组、IPO组和IPC+IPO组心肌梗死面积均低于IR组(P<0.05)，而IPC、IPO、IPC+IPO三组之间差别无统计学意义。③血生化指标表明：SoD在IPC组(88.95±7.73)、IPO组(85.36±7.20)、 IPC+IP0组(84.69±11.68)，均高于IR组(65.19±7.73)，(P<0.05)。但IR组MDA却明显高于IPC组、IPO组和IPC+IP0组，(P<0.05)。④PKCα测定结果表明NC组PKCα阳性率为9.29±1.16％，IR组为9.42±1.35％，IPC组为66.60±7.85％，IPO组为61.41±6.95％，IPC+IP0组为61.97±2.80％。前两组明显低于后三组(P<0.01)，有统计学意义。而后三组之间无明显差别。⑤心律失常发生率：NC组0，IR组90％，IPC组、IPO组、IPC+IPO组分别为10％、20％、20％，IR组明显高于后三组(P<0.00714)，后三组之间无明显差异(P=1.000)。⑥形态学研究表明：HE光镜及透射电镜观察IPC组、IP0组和IPC+IPO组心肌损伤程度较IR组明显减轻：但IPC组、IPO组和IPC+IPO组具有相似的形态学变化。 结论：1 缺血再灌注损伤可明显破坏心肌细胞，导致细胞坏死，增加心律失常发生率。2心肌缺血预处理、心肌缺血后处理及心肌缺血预处理+心肌缺血后处理均可减轻再灌注损伤，缩小梗死面积，从而保护了心肌细胞。3 PKCα参与了心肌缺血预处理、心肌缺血后处理及心肌缺血预处理+心肌缺血后处理心肌保护过程。本实验未观察到心肌缺血预处理和心肌缺血后处理有叠加作用。 收起