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[学位论文] 陈华曦湖北中医药大学 2008年硕士导师: 许腊英;毛维伦共66页

摘要 : 本课题是湖北省科技攻关标准炮制品牌研究课题。主要对湖北省恩施鹤峰县的道地药材——续断的炮制工艺及其质量标准进行了规范化研究。续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C．Y Chengel T．M．Ai的干燥根．性味苦辛，微温；入肝、肾二经．具... 展开本课题是湖北省科技攻关标准炮制品牌研究课题。主要对湖北省恩施鹤峰县的道地药材——续断的炮制工艺及其质量标准进行了规范化研究。续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C．Y Chengel T．M．Ai的干燥根．性味苦辛，微温；入肝、肾二经．具有补肝肾，续筋骨，调血脉的功效。临床上续断生品以补肝肾，通血脉为主；酒炙后能增强通血脉，强筋骨作用；盐炙后能引药下行，增强补肾强腰作用。本文对续断的炮制历史沿革及现代研究进展进行了文献研究；在续断炮制工艺研究中采用正交筛选，经过多指标综合分析，制定出可控的量化工艺．在炮制工艺筛选中，研究了酒炙正交的九份样品的含量测定。采用现代仪器分析方法制订了净续断及酒炙续断的质量标准草案。在续断的鉴别项中采用创新法——紫外谱线组法鉴别净续断及酒炙续断，在检查项下添加了农药残留量的测定，还对续断饮片炮制前后的药效作用进行了探讨研究，采用HPLC法对续断饮品的指纹图谱进行了初步的研究。为使续断炮制工艺向机械化、产业化发展，提高续断饮品质量，研究炮制原理提供了参考。 1.炮制工艺研究根据炮制的规范化研究要求，为了达到炮制的目的，增强续断的临床疗效，采用续断的道地药材，即湖北省恩施鹤峰县GAP种植基地的续断，从水处理、浸润切制、干燥、酒炙等炮制工艺进行了全程系统测定。筛选出了各个环节最佳炮制方法的量化数据，使续断的净制工艺及酒炙工艺更易推广到中药饮片产业化大生产中去。首先对从GAP种植基地采挖的续断进行净选，除去泥、沙，去除须根、芦头及其杂质，再将其60℃左右烘干保存。在水处理的研究中，通过加水量、水洗次数、水洗时间三因素三水平的正交设计研究，考察了续断皂苷VI含量、水溶性浸出物含量、醇溶性浸出物含量、总灰分等多指标，采用b(34)正交试验方法和方差分析，优选出最佳水洗工艺，即5倍量水，水洗4次，洗3分钟，并对最佳水洗工艺进行验证试验。在干燥工艺的研究中，通过干燥温度、时间的比较试验，考察了水分及碾粉的难易度，优选出最佳干燥工艺，即用17个小时烘制续断，温度是60℃。并对最佳干燥工艺进行验证试验。酒炙工艺研究，通过预试采用黄酒为辅料，闷润以黄酒全部被吸尽为标准，通过黄酒用量、炒炙温度、炒炙时间三因素三水平的正交设计研究，考察了续断皂苷Ⅵ的含量，采用L9(34)正交试验方法和方差分析，优选出最佳酒炙工艺，即10％的黄酒用量，用150℃，炒炙6min。并对最佳酒炙工艺进行了验证试验。 2.质量标准研究对净续断、酒炙续断的各种化学性质，从性状、鉴别、检查、含量测定等方面建立了全套饮片的质量控制指标。在鉴别过程中，采用紫外谱线组法鉴别了净续断与酒炙续断，以谱线组的全部吸收峰数、峰位、峰形为鉴别依据，该法比单一溶剂提取的紫外光谱鉴别特征性更强，具有取样量小、简便、快速、准确等特点。对净续断及酒炙续断采用高效液相色谱法进行了含量测定，结果线性关系良好，精密度、稳定性和重现性好，操作简单。对市面上销售的续断饮片也进行了抽样调查，对比了它们和实验室炮制的饮片的质量差别。还对续GAP产地的品种进行指纹图谱的初步研究， 3.药效学研究对净续断及酒炙续断饮片的水煎液分别作了药效实验加以比较，初步探讨了炮制前后的药理作用变化。本课题为续断饮片制定了可行的规范化炮制工艺和质量标准，提高现行的炮制工艺和质量标准水平，为制定国家标准提供依据。通过本课题研究，在源头上控制中药饮片，保证药材“真实、优质、稳定、可控”的基本要求，达到最大限度地利用药材，充分发挥药效，对最佳炮制方法制定具体可行的工艺技术参数，实现续断饮片炮制工艺的规范化与现代化。收起

关键词 : 续断炮制工艺

2. 低温胁迫对川续断中川续皂苷Ⅵ积累的影响及其分子机制研究

[学位论文] 冯汪银贵州中医药大学 2020年硕士导师: 周涛共82页

摘要 : 目的:基于不同海拔川续断根转录组数据库，探究低温胁迫影响川续断中川续断皂苷Ⅵ积累的分子机制，旨在为揭示海拔影响川续断质量的形成规律提供研究基础。方法:1.利用RNA-seq相关分析方法，从转录组中筛选低温响应川续断皂苷Ⅵ合成的相关差异表... 展开目的:基于不同海拔川续断根转录组数据库，探究低温胁迫影响川续断中川续断皂苷Ⅵ积累的分子机制，旨在为揭示海拔影响川续断质量的形成规律提供研究基础。方法:1.利用RNA-seq相关分析方法，从转录组中筛选低温响应川续断皂苷Ⅵ合成的相关差异表达基因。2.设计低温胁迫实验，测量川续断植株地上部分与地下部分生长指标，同时测定其根中的川续断皂苷Ⅵ含量，利用SPSS17.0、Graphpad7.0软件对数据进行显著性和相关性分析，探讨低温胁迫对川续断表型的影响。3.基于低温响应川续断皂苷Ⅵ合成的相关差异表达基因，以低温胁迫后的川续断根为材料，利用RT-PCR和qRT-PCR对各差异表达基因进行筛选及验证，初步探究低温胁迫对川续断皂苷Ⅵ生物合成的分子机制。结果:1.通过分析川续断根转录组数据，发现川续断感应温度刺激引起的机体反应最为明显，共筛选获得29个低温响应川续断皂苷Ⅵ合成的相关差异表达基因。其中有6个与低温诱导有关，即Da Hsp70、Da Hsp7C、Da THI1、DaGAPDH、DaDNJH、DaGRP;有3个为赤霉素合成相关基因(DaGA2ox6、DaGA20ox、DaGASA4);有11个为川续断皂苷Ⅵ合成相关酶基因（Daβ-AS、DaAACT、DaMVD、DaSS、DaHMGR、DaHMGS、DaGPPS、DaFPPS、DaSE、DaUDP、DaMVK）;有9个为转录因子(DaNF-YA2、DaNF-YA6、DaDOF4.6、DaGATA5、DaC2C2、DaRAP2-3、DaRAP2-4、DaERF1、DaERF12)。 2.低温胁迫下，川续断的株高、地上生物量鲜重、地下生物量鲜重均减少或降低，但川续断皂苷Ⅵ含量极显著升高，且与地下部分积累呈显著正相关。 3.通过RT-PCR及qRT-PCR验证分析，获得12个影响川续断皂苷Ⅵ合成的候选基因，即川续断皂苷Ⅵ含量与DaGASA4、DaRAP2-3、DaERF12、DaDOF4.6、DaAACT、DaMVD、DaHMGR、DaSS、Daβ-AS呈极显著正相关，与DaTHI1呈显著正相关，而与Da NF-YA2呈极显著负相关，与Da Hsp70呈显著负相关。其中，DaGASA4、DaRAP2-3、DaERF12、DaDOF4.6均与川续断皂苷Ⅵ合成途径上的DaAACT、DaMVD、DaSS、Daβ-AS呈显著或极显著正相关。结论:低温胁迫下川续断植株生长缓慢，而川续断皂苷Ⅵ含量却显著增加，与高海拔植株矮小、川续断皂苷Ⅵ含量升高的表型相似，推测其原因可能是受到赤霉素合成酶DaGASA4及转录因子DaRAP2-3、DaERF12、DaDOF4.6等基因的复杂调控作用。本文可为深入阐明海拔影响川续断质量的形成规律提供重要研究基础。收起

关键词 : 川续断低温胁迫川续断皂苷Ⅵ 生物合成药材质量

3. 续断“标准煎液”工艺优选及配方颗粒质量研究

[学位论文] 高乐河北医科大学 2017年硕士导师: 王鑫国共77页

摘要 : 续断为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall. ex Henry的干燥根，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效，用于治疗风湿痹痛、腰膝酸软、跌扑损伤、崩漏、胎漏等症。续断配方颗粒是由符合炮制规范的续断饮片，经现代化的工艺提取、浓缩、... 展开续断为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall. ex Henry的干燥根，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效，用于治疗风湿痹痛、腰膝酸软、跌扑损伤、崩漏、胎漏等症。续断配方颗粒是由符合炮制规范的续断饮片，经现代化的工艺提取、浓缩、干燥、制粒加工而成，具有服用方便，便于储存携带等特点。为了保证续断配方颗粒的质量，确保其用药的安全性和有效性，本论文对续断“标准煎液”的工艺进行了优选，确定了工艺参数；测定了采用优选工艺制备的10批续断“标准煎液”的出膏率以及川续断皂苷VI的含量，并规定了出膏率和川续断皂苷VI含量的变化范围。对以此工艺生产的10批续断配方颗粒进行了川续断皂苷VI的含量测定以及“标准煎液”和配方颗粒的指纹图谱研究，并对两者对照图谱进行对比。目的：确定续断“标准煎液”工艺，制备10批续断“标准煎液”并测定出膏率和川续断皂苷VI的含量，规定出膏率和川续断皂苷VI含量的变化范围。建立续断配方颗粒的含量测定和指纹图谱分析方法，对比“标准煎液”和配方颗粒的对照图谱，为控制续断配方颗粒的质量和临床应用研究提供参考。方法： 1.采用单因素试验，以出膏率和川续断皂苷VI的含量为指标对提取加水量、煎煮时间、煎煮次数等因素进行单因素考察，通过工艺验证试验确定工艺，以该工艺制备10批续断“标准煎液”，测定10批续断“标准煎液”的出膏率和川续断皂苷VI的含量，并以均值加减3倍标准偏差（SD）来规定出膏率和川续断皂苷VI含量的变化范围。 2.采用高效液相色谱仪（HPLC）对川续断皂苷VI的含量进行测定，以依利特SinoChrom ODS-AP柱（4.6×150mm，5μm）为色谱柱；流动相：乙腈-水（30:70）；检测波长为212nm；流速：1mL/min；柱温：35℃；进样量10μL。 3.采用超高效液相色谱仪（UPLC）对10批续断“标准煎液”和配方颗粒的指纹图谱进行研究并对比两者对照图谱，以Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1x100mm，1.7μm）为色谱柱；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长为220nm；流速为0.3mL/min；柱温为40℃；进样量为1μL。结果： 1.最佳工艺为：一煎加水13倍，浸泡30min，武火煮沸，文火保持微沸60min，趁热用100目筛网分离煎液；二煎加水11倍，武火煮沸，文火保持微沸40min，趁热用100目筛网分离煎液，合并两次煎液，迅速冷却。50℃真空减压浓缩密度约为1.1时，冷冻干燥成干膏粉。10批续断“标准煎液”出膏率的范围为37.9%~42.7%，以均值加减3倍SD来规定出膏率的范围为36.5%~44.0%。川续断皂苷VI的含量范围为42.04mg/g~62.54mg/g，以均值加减3倍SD来规定川续断皂苷VI的含量范围为37.39m g/g~76.23mg/g。 2.川续断皂苷Ⅵ进样量在0.4840～4.8400μg范围内线性关系良好， r=0.9999，平均回收率为98.49%，供试品溶液在24h内稳定，重复性川续断皂苷VI含量的RSD为1.13%。10批续断配方颗粒中川续断皂苷VI的平均含量为59.89mg/g。 3.建立了10批续断“标准煎液”和配方颗粒的指纹图谱，标定了17个共有峰，通过与对照品图谱比对，指认了绿原酸、咖啡酸、马钱苷、川续断皂苷VI4个成分，10批续断“标准煎液”的相似度均在0.9以上，10批续断配方颗粒的相似度均在0.95以上。结论：优选的续断“标准煎液”工艺稳定可靠、重复性好，所规定的出膏率和川续断皂苷VI含量的范围合理，可为配方颗粒的生产提供指导。所建立的续断配方颗粒的含量测定和指纹图谱分析方法准确、稳定、重复性好。通过续断“标准煎液”和配方颗粒的对照图谱比对，反映出两者化学成分基本相同，具有质量一致性，可为全面控制续断配方颗粒的质量和临床应用研究提供参考。收起

关键词 : 续断配方颗粒液相色谱指纹图谱川续断皂苷标准煎液

4. 川续断斑枯病（Septoria dipsaci）的研究

[学位论文] 谢莉四川农业大学 2009年硕士导师: 叶华智共38页

摘要 : 川续断斑枯病是川续断种植区普遍发生的一种新病害。本文首次系统报道了川续断斑枯病的症状、病原物鉴定、生物学特性、侵染过程、病害田间发生规律以及室内药剂的筛选，为诊断和有效防治该病害提供了理论依据。 1、病原菌的分离与种类鉴定 ... 展开川续断斑枯病是川续断种植区普遍发生的一种新病害。本文首次系统报道了川续断斑枯病的症状、病原物鉴定、生物学特性、侵染过程、病害田间发生规律以及室内药剂的筛选，为诊断和有效防治该病害提供了理论依据。 1、病原菌的分离与种类鉴定川续断斑枯病的病斑生于叶上，发病初期为暗绿色小斑，之后逐渐扩大，病斑呈紫褐色，并受叶脉限制呈不规则形或多角形，后期病斑中央灰白色，边缘紫褐色，并具有淡紫色至淡黄色晕圈，直径1～3mm，上面密生小黑点（分生孢子器），病斑多时常汇合成片，引起植株叶片变褐枯死。植株成叶发病较重，幼嫩新叶发病较轻。引起川续断斑枯病的病原菌为壳针孢属真菌（Septoria dipsaci），这是国内首次报道壳针孢属真菌危害川续断。病原菌的分生孢子器叶面生，散生或聚生，球形，孔口微露，淡褐色至暗褐色，直径52～1081．μm，孔口圆形；分生孢子针形，基部钝圆，顶端略尖，无色，直或微弯，有1～6个不明显隔膜，多数3～6个隔膜，23．9～64．4μm×1．4～2．3μm。 2、川续断斑枯病菌的生物学特性研究病原菌在10～30℃均能生长和产孢，最适温度为25℃；病原菌生长可利用多种糖类作为碳源，对氮源的利用以无机铵态氮最好；在pH4～10的范围内，病原菌能生长和产孢，产孢最适pH值为7；光照对菌丝生长及产孢无显著影响；加入寄主汁液有利于产孢、孢子的萌发及芽管的伸长。在10～35℃、pH3～10、RH>90％的条件下病原菌分生孢子能萌发，最适条件为25℃、pH6和在水滴中，且pH为7时芽管伸长最快。病原菌分生孢子的致死温度为52℃（10min）。 3、病原菌的侵染及其影响因素在接种后24h分生孢子开始萌发。萌发的方式多样，多从孢子的一端或两端长出芽管，少见一端两侧或两端一侧长出。分生孢子在叶片表面萌发，形成分枝的菌丝，以菌丝作为侵染结构。病原菌可以通过表皮而不通过气孔侵入寄主，菌丝在侵入细胞时，不形成附着孢。菌丝侵入叶肉组织后可继续穿过多个细胞向深层发展，不断的产生新的分枝。被侵染的细胞最初结构大都完好，后期大部分遭到破坏，表现为细胞变成黄色至紫红色，叶肉细胞内颗粒化，之后细胞坏死，最终细胞变空、解体。病原菌侵染川续断的温度范围为15～28℃，最适发病温度为25～28℃，此时潜育期最短，为8d，病斑数量最多，病情发展最快；保湿时间范围在12～48h时，植株均能发病，最佳保湿时间为24～36h，其潜育期最短。病原菌在老叶上比在新叶上更容易侵入，叶龄越大侵染率越高。 4、川续断斑枯病发生规律的研究病原菌主要是以菌丝体和分生孢子器在田间病残体和冬季植株上越冬。病害的初侵染源主要是冬季植株的病叶和田间病残体。最初在植株下部老叶上发病，随后分生孢子藉雨滴飞溅的方式传播，在川续断生长期中不断引起再侵染。 2008．3～2008．9对田间病害发生动态定点调查结果是：病害始发期为3月中旬，病株率为11．76％；4月底至5月下旬病害迅速发展，5月26日病株率和病叶率分别为82．35％和49．65％，病情指数为34．21；6月份进入发病高峰期，6月10日病株率和病叶率达到最高分别为100％和51．83％，病情指数为34．62。到8月中旬，川续断进入了生育后期，叶片普遍出现生理性变黄枯萎，病情发展基本停止。 5、室内药剂测定采用药皿法和玻片萌发法测定了多菌灵、甲基硫菌灵硫、百菌清、烯唑醇、硫酸铜五种杀菌剂对川续断斑枯病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。结果表明：多菌灵对菌丝生长和孢子萌发的抑制作用最强；甲基硫菌灵硫、烯唑醇和硫酸铜这三种药剂对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用均较好：百菌清对病菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用最差。收起

关键词 : 川续断川续断斑枯病壳针孢病原物鉴定病害田间规律药剂筛选

5. 续断资源调查及质量评价研究

[学位论文] 刘永成都中医药大学 2009年硕士导师: 卫莹芳共83页

摘要 : 续断是川产道地药材之一，药用历史悠久，有较好的临床应用价值。《中国药典》2005年版一部规定续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C．Y．Cheng et T．M．Ai的干燥根，具有行血消肿、生肌止痛、续筋接骨、补肝肾，强腰膝、安胎、止崩漏的功... 展开续断是川产道地药材之一，药用历史悠久，有较好的临床应用价值。《中国药典》2005年版一部规定续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C．Y．Cheng et T．M．Ai的干燥根，具有行血消肿、生肌止痛、续筋接骨、补肝肾，强腰膝、安胎、止崩漏的功效。续断主要来源于野生药材，近年来国内外市场对续断药材需求量逐年加大，导致采挖过度，使野生资源越来越少，全国资源状况不清。本文为国家环境保护总局项目“全国重点药用生物物种资源调查”子课题“续断生物资源调查”的研究内容，在续断道地产区资源调查的基础上对全国不同产地药材质量进行深入研究，取得了以下成果并有所创新： 1.本草考证表明，续断始载于《神农本草经》，列为上品。续断的品种在历代本草中既有变化而且复杂：到清代，川续断D．Asperoides已经成为中药续断的唯一正品来源，并延续至今。 2.对续断道地产区的两省十个区县进行了资源调查。在文献查考和实地调研的基础上，对续断资源分布状况、储量、质量、使用现状及市场需求等进行了分析和整理。初步摸清续断资源情况，查明资源在利用、保护和管理方面存在的问题并提出建议，为国家制定续断资源保护政策提供了依据。 3.建立了续断总皂苷含量测定方法。以新配制的5%香草醛-冰醋酸、高氯酸溶液为显色剂，在548nm处测定吸光度。通过单因素试验和正交试验得出续断总皂苷的最优提取方法。新建立了续断总生物碱含量测定方法。用溴甲酚绿显色在416nm处测定吸光度。 4.本文首次用UV、HPLC法同时测定了全国九个省市37个产地续断药材中总皂苷、川续断皂苷Ⅵ的含量，2 3个产地药材中总生物碱的含量。试验结果表明不同产地续断药材样品中总皂苷、总生物碱、川续断皂苷Ⅵ的含量均有差异。建议续断总皂苷含量不得少于8.40%，总生物碱含量不得少于0.040%，川续断皂苷Ⅵ含量仍按《中国药典》2005年版规定，不得少于2.0%。 5.本文首次建立了全国不同产地续断药材HPLC指纹图谱，初步建立其皂苷类成分的共有模式，确定了14个色谱峰为共有峰，其中第9号峰为川续断皂苷Ⅵ。首次采用HPLC指纹图谱对全国不同产地的续断药材进行了相似度评价，全国不同产地续断药材有较好的相似度，但也存在一定差异，较全面地反映了续断药材的内在品质。 6.本文在《中国药典》2005年版一部续断质量标准的基础上新增了醇溶性浸出物的测定：照《中国药典》2005年版一部附录X A醇溶性浸出物项下的热浸法测定，建议用45%乙醇作溶剂，不得少于48.0%。 7.本文对全国九个省、市续断药材样品进行了水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的测定，都有部分样品超过药典限量标准。水分限量超标可能引起霉变，降低质量。灰分限量超标说明其纯净度较低，建议在采收加工过程中应该注意泥沙等杂质的去除。 8.还对续断药材和续断皂苷薄层色谱鉴别的展开系统进行了筛选，结果表明：《中国药典》2005年版续断项下的展开系统最优。收起

关键词 : 续断道地药材种质资源调查川续断皂苷Ⅵ 总生物碱 HPLC指纹图谱质量评价

6. 杜仲--续断药对促进骨质疏松骨折愈合的作用机制研究

[学位论文] 邹艺璇山东中医药大学 2023年硕士导师: 王加锋共77页

摘要 : 目的:研究探讨杜仲—续断(Duzhong-Xuduan,DX)对骨质疏松骨折愈合的促进作用及其对骨内H型血管相关蛋白SLIT3、CD31、EMCN水平的影响，为DX通过调控H型血管生成促进骨质疏松骨折愈合提供理论基础与科学依据。方法:实验采用C57BL/6雌性小鼠60只，... 展开目的:研究探讨杜仲—续断(Duzhong-Xuduan,DX)对骨质疏松骨折愈合的促进作用及其对骨内H型血管相关蛋白SLIT3、CD31、EMCN水平的影响，为DX通过调控H型血管生成促进骨质疏松骨折愈合提供理论基础与科学依据。方法:实验采用C57BL/6雌性小鼠60只，分为正常对照组、模型对照组、DX低剂量组、DX中剂量组、DX高剂量组、阳性药物组，每组各10只;除正常对照组外，手术制备去卵巢(Ovariectomized,OVX)模拟骨质疏松症小鼠模型;OVX术后1周起，按DX剂量0、0、7.5、15、30mg/20g体重/日分别灌胃正常对照组、模型组、DX低剂量组、DX中剂量组、DX高剂量组,阳性药物组给予甲状旁腺激素(Parathyroidhormone,PTH)1.6μg/20g体重/2日腹腔注射，共给药8周;OVX术后5周，除正常对照组外，手术制备开放性左股骨干骨折小鼠模型;末次给药24h后取材，收集小鼠骨折股骨及椎体骨组织。微计算机断层扫描(Micro-Computedtomography,Micro-CT)成像，测定骨体积分数、骨小梁数目、骨表面积侵蚀率、骨表面积形成率等;骨生物力学试验，测试小鼠骨折股骨的最大荷载和刚性系数;HE染色，观察小鼠骨折股骨的病理学变化;免疫染色，检测小鼠骨组织中SLIT3、CD31、EMCN的表达水平，从而做DX通过调控H型血管生成促进骨质疏松骨折小鼠骨折愈合及骨质改善的作用机制研究。结果: 1.Micro-CT结果表明，模型对照组与空白对照组相比，小鼠骨体积分数减少、骨小梁数量减少、骨表面积侵蚀率增加、左股骨干发生截断，骨质疏松骨折模型建立成功。 2.Micro-CT和骨组织形态学分析表明，DX给药组相比于模型对照组增加了骨体积分数、骨小梁数量和骨表面积形成率，并减少了骨表面积侵蚀率;与模型对照组的小鼠相比，DX给药组骨折断端骨痂明显，且L3椎体的骨小梁数量增加。骨生物力学显示,DX给药组小鼠相比于模型对照组最大负荷和刚性系数呈剂量依赖性升高。这些结果共同表明，DX可以促进小鼠骨质疏松骨折模型的骨折愈合，改善骨质流失。 3.H型血管内皮的表面标志物CD31和EMCN主要定位于骨内和骨骺区，对实验小鼠的骨折股骨进行免疫荧光染色发现，模型对照组在骨干区内侧、骨骺区的CD31和EMCN阳性染色低于空白对照组，DX中剂量组给药后可提高CD31和EMCN在骨干区、骨骺区的表达水平，这表明DX增加了H型血管的血管生成。 4.促血管生成因子SLIT3是血管生成与成骨因子结合因子，对实验小鼠的骨折股骨进行免疫组化染色发现，模型对照组骨组织内SLIT3表达水平相比于空白对照组下降，而DX给药组相比于模型对照组SLIT3的表达水平有所提高，提示DX通过促进H型血管的血管生成来促进成骨作用，从而促进骨质疏松性骨折的愈合。结论:DX可以促进OVX联合股骨干骨折小鼠的骨折愈合，并且改善骨质，提高骨体积分数、骨小梁数量和骨表面积形成率，减少骨表面积侵蚀率;且这种调控作用与Slit3、CD31、EMCN的表达水平相关，表明DX对骨质疏松骨折愈合的促进作用可能是通过调控骨内H型血管生成实现的。收起

关键词 : 骨折骨质疏松杜仲&mdash 续断 H型血管 SLIT3

7. 活血续断方对大鼠骨创伤愈合的影响

[学位论文] 陈旭东广西中医药大学 2011年硕士导师: 叶日乔共54页

摘要 : 目的：本研究旨在通过动物实验观察中药方剂活血续断方对大鼠骨创伤模型的愈合指标：血清钙、磷浓度和碱性磷酸酶水平、骨痂骨密度的影响，为临床用药提供理论和实验依据。方法：取SD大鼠50只，雌、雄各半，体重180-220g，随机分为5组，每组10只... 展开目的：本研究旨在通过动物实验观察中药方剂活血续断方对大鼠骨创伤模型的愈合指标：血清钙、磷浓度和碱性磷酸酶水平、骨痂骨密度的影响，为临床用药提供理论和实验依据。方法：取SD大鼠50只，雌、雄各半，体重180-220g，随机分为5组，每组10只，即模型组、阳性药组（接骨七厘片组，50.0g.kg-1）、活血续断方高剂量组（80g生药.kg-1）、活血续断方中剂量组（40g生药.kg-1）、活血续断方低剂量组（20g生药.kg-1）。造模后开始灌胃给药，每日1次，用药剂量按动物体重换算。活血续断方组从造模后第一天开始，将中药活血续断方按高剂量（相当于生药80g生药.kg-1）、中剂量（相当于生药40g生药.kg-1）、低剂量（相当于生药20g生药.kg-1）以灌胃的方式给大鼠喂药，分别以蒸馏水配成浓度为4.0、2.0、1.0g生药/ml的药液，1次/天，共42天；阳性药从造模后第一天开始，给予接骨七厘片（浓度为2.5g生药/ml，以蒸馏水溶解）50.0g生药.kg-1，灌胃给药，1次/天，共42天；模型组灌胃等量的蒸馏水20ml.kg-1，1次/天，共42天。给药期间观察大鼠的一般状况、伤肢活动、饮食和伤口愈合情况。末次给药后2小时，用3%戊巴比妥钠30mg.kg-1麻醉大鼠，从腹主动脉采血10ml，离心分离血清，用全自动生化分析仪测定大鼠血清钙、磷浓度和碱性磷酸酶水平。X线拍片检测骨痂生长情况、用Image Prplus5.1软件，根据X光片骨痂面积和透光度高低，分析骨痂骨密度。用统计软件SPSS13.0软件包对数据进行统计学处理。结果：1.各给药组及模型组在术后给药20天、42天后体重明显增长，各组间体重增长比较差异无统计学意义。2.术后42天，4个给药组血清碱性磷酸酶水平、血清钙、血清磷浓度较模型对照组升高，高剂量组与阳性药组血清碱性磷酸酶水平、血清钙、血清磷浓度均显著高于模型对照组（P＜0.05）。3.术后42天，4个给药组骨痂密度较模型对照组升高，高剂量组与阳性药组骨痂密度均显著高于模型对照组（P＜0.05）。结论：中药方剂活血续断方能明显提高大鼠血清钙、磷浓度和碱性磷酸酶水平，影响血清钙磷溶出与沉积之间的平衡状态，促进创伤骨骨痂形成，强化骨痂局部钙磷沉积，提高骨痂骨密度。有效促进大鼠骨创伤愈合。收起

关键词 : 活血续断方骨创伤愈合机制动物实验

8. 续断促进骨折愈合的实验和临床研究

[学位论文] 俞仲翔上海中医药大学 2003年硕士导师: 汤荣光共32页

摘要 : 目的:通过观察续续断对大鼠骨折模型的愈合过程,阐明续断促进骨折愈合的作用机理.方法:用成年雄性SD大鼠(250g)40只,作双侧胚骨上段骨缺损模型,随机分为A、B两组.造模后第二天,A组灌服续断煎剂2.5ml(水提取液含生药量为0.25g/ml),B组灌服生理盐水2.5m... 展开

关键词 : 续断骨折愈合 Ⅰ型胶原原位杂交

9. 续断资源调查及质量评价研究

[学位论文] 刘永成都中医药大学 2009年硕士导师: 卫莹芳共84页

摘要 : 续断是川产道地药材之一,药用历史悠久,有较好的临床应用价值。《中国药典》2005年版一部规定续断为川续断科植物川续断 Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et T.M.Ai的干燥根,具有行血消肿、生肌止痛、续筋接骨、补肝肾,强腰膝、安胎、止崩漏的功效。 ... 展开续断是川产道地药材之一,药用历史悠久,有较好的临床应用价值。《中国药典》2005年版一部规定续断为川续断科植物川续断 Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et T.M.Ai的干燥根,具有行血消肿、生肌止痛、续筋接骨、补肝肾,强腰膝、安胎、止崩漏的功效。续断主要来源于野生药材,近年来国内外市场对续断药材需求量逐年加大,导致采挖过度,使野生资源越来越少,全国资源状况不清。本文为国家环境保护总局项目“全国重点药用生物物种资源调查”子课题“续断生物资源调查”的研究内容,在续断道地产区资源调查的基础上对全国不同产地药材质量进行深入研究,取得了以下成果并有所创新: 1.本草考证表明,续断始载于《神农本草经》,列为上品。续断的品种在历代本草中既有变化而且复杂:到清代,川续断D.asperoides已经成为中药续断的唯一正品来源,并延续至今。 2.对续断道地产区的两省十个区县进行了资源调查。在文献查考和实地调研的基础上,对续断资源分布状况、储量、质量、使用现状及市场需求等进行了分析和整理。初步摸清续断资源情况,查明资源在利用、保护和管理方面存在的问题并提出建议,为国家制定续断资源保护政策提供了依据。 3.建立了续断总皂苷含量测定方法。以新配制的5%香草醛-冰醋酸、高氯酸溶液为显色剂,在548nm处测定吸光度。通过单因素试验和正交试验得出续断总皂苷的最优提取方法。新建立了续断总生物碱含量测定方法。用溴甲酚绿显色在416nm处测定吸光度。 4.本文首次用UV、HPLC法同时测定了全国九个省市37个产地续断药材中总皂苷、川续断皂苷Ⅵ的含量,23个产地药材中总生物碱的含量。试验结果表明不同产地续断药材样品中总皂苷、总生物碱、川续断皂苷Ⅵ的含量均有差异。建议续断总皂苷含量不得少于8.40%,总生物碱含量不得少于0.040%,川续断皂苷Ⅵ含量仍按《中国药典》2005年版规定,不得少于2.0%。 5.本文首次建立了全国不同产地续断药材HPLC指纹图谱,初步建立其皂苷类成分的共有模式,确定了14个色谱峰为共有峰,其中第9号峰为川续断皂苷Ⅵ。首次采用HPLC指纹图谱对全国不同产地的续断药材进行了相似度评价,全国不同产地续断药材有较好的相似度,但也存在一定差异,较全面地反映了续断药材的内在品质。 6.本文在《中国药典》2005年版一部续断质量标准的基础上新增了醇溶性浸出物的测定:照《中国药典》2005年版一部附录X A醇溶性浸出物项下的热浸法测定,建议用45%乙醇作溶剂,不得少于48.0%。 7.本文对全国九个省、市续断药材样品进行了水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的测定,都有部分样品超过药典限量标准。水分限量超标可能引起霉变,降低质量。灰分限量超标说明其纯净度较低,建议在采收加工过程中应该注意泥沙等杂质的去除。 8.还对续断药材和续断皂苷薄层色谱鉴别的展开系统进行了筛选,结果表明:《中国药典》2005年版续断项下的展开系统最优。收起

关键词 : 续断资源调查质量标准评价方法

10. 续断、鹿衔草、锁阳对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用及机理探讨

[学位论文] 李艳中国中医科学院 2011年硕士导师: 鞠大宏共77页

摘要 : 目的以卵巢切除所致的大鼠骨质疏松症为模型,采用骨组织形态计量学方法,观察具有温补肾阳作用的单味中药续断、鹿衔草以及锁阳对其的治疗作用,并从破骨细胞分化调节因子OPG、RANKL以及与骨代谢密切相关的细胞因子IL-1、IL-6的角度,探讨其作用环... 展开目的以卵巢切除所致的大鼠骨质疏松症为模型,采用骨组织形态计量学方法,观察具有温补肾阳作用的单味中药续断、鹿衔草以及锁阳对其的治疗作用,并从破骨细胞分化调节因子OPG、RANKL以及与骨代谢密切相关的细胞因子IL-1、IL-6的角度,探讨其作用环节及作用特点,为中医药治疗骨质疏松症及“肾主骨”机理提供进一步的实验依据。方法本实验选用雌性Wistar大鼠81只,体重250±20g,SPF级。将81只雌性Wistar大鼠随机分为3组:空白对照组12只、假手术组12只和造模组57只。造模组大鼠用戊巴比妥钠麻醉后,摘除双侧卵巢；假手术组摘取少许脂肪组织。术后1个月,再将造模组大鼠随机分为5组:模型组12只、己烯雌酚组12只、续断组11只、鹿衔草组11只和锁阳组11只。开始灌胃给药:中药组灌胃给予浓度为1g生药／ml的水煎剂,给药体积均为5.6ml／kg体重,即给药剂量为5.6g／kg体重；己烯雌酚组灌胃给予0.008mg／ml的己烯雌酚,给药剂量为0.0448mg／kg体重；空白对照组、假手术组、模型组则灌服等体积的蒸馏水。以上各组大鼠灌胃给药3个月,每日1次,连续灌胃给药6天,中间休息1天。大鼠于处死前15天和前3天分别给予腹腔注射盐酸四环素30mg／kg体重,对骨进行荧光标记。在灌胃给药结束后,每组大鼠均以45mg／kg剂量的戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉,采用股动脉取血,所取全血静置1个小时后,经2000rmp离心10min后取血清,-20℃冰冻保存备用,用于IL-1、IL-6含量的检测。然后,将大鼠迅速麻醉处死,取右侧胫骨,用4％多聚甲醛溶液固定,制作不脱钙骨切片,用于骨组织形态计量学检测；取左侧胫骨用0.1MPBS(PH7.3)配制的4％多聚甲醛溶液固定,制作脱钙的冰冻切片用于OPG、RANKL蛋白和其mRNA表达检测。统计学分析实验结果皆采用均数±标准差((x)±s表示,以单因素方差分析(ANOVA)进行数据处理,组间两两比较,采用g检验。结果 1续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨骨组织形态计量学指标的影响 1.1续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨骨小梁体积百分比(TBV％)的影响模型组大鼠胫骨TBV％较假手术组降低。与模型组比较,续断组、鹿衔草组和阳性对照组的大鼠胫骨TBV％显著增加；而锁阳组则无显著性差异。续断组、鹿衔草组和锁阳组大鼠胫骨TBV％较假手术组明显降低,阳性对照组较假手术组则无显著性差异。见表1。 1.2续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨骨小梁吸收表面百分比(TRS％)的影响与假手术组相比,模型组大鼠胫骨TRS％明显增加。续断组、鹿衔草组及阳性对照组较模型组大鼠胫骨TRS％明显降低；锁阳组较模型组则无显著性变化。续断组、锁阳组与假手术组相比,显著增高；鹿衔草组和阳性对照组较假手术组则无显著性差异。见表2。 1.3续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨骨小梁形成表面百分比(TFS％)和骨小梁矿化率(MAR)的影响模型组鼠胫骨TFS％和MAR明显高于假手术组。与模型组相比,续断组和阳性对照组大鼠胫骨TFS％和MAR显著降低,鹿衔草组、锁阳组则无显著性差异。与假手术组相比,续断组、鹿衔草组和锁阳组均显著增高,阳性对照组则无明显差异。以上结果见表3。 1.4续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨骨皮质矿化率(mAR)和类皮质平均宽度(OSW)的影响模型组较假手术组大鼠胫骨mAR和OSW明显升高。续断组、鹿衔草组和锁阳组较模型组大鼠胫骨mAR和OSW均无显著性差异,但较假手术组均升高。阳性对照组大鼠胫骨mAR和OSW低于模型组,与假手术组无显著性差异。结果见表4。 2续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG和RANKL表达的影响 2.1续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达的影响与假手术组相比,模型组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达均明显降低。与模型组相比,鹿衔草组和阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达明显增高；续断组、锁阳组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达无显著差异。续断组、锁阳组较假手术组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达明显降低；鹿衔草组和阳性对照组与假手术组相比,无显著性差异。以上结果见表5。 2.2续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞RANKL蛋白表达的影响模型组大鼠胫骨成骨细胞RANKL蛋白表达明显高于假手术组。续断组、鹿衔草组以及阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞RANKL蛋白表达较模型组显著下调,锁阳组无显著性变化。与假手术组相比,续断组与锁阳组大鼠胫骨成骨细胞RANKL蛋白表达显著上调；鹿衔草组和阳性对照组则无明显差异。模型组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKL蛋白表达高于假手术组。与模型组比较,续断组、鹿衔草组以及阳性对照组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKL蛋白表达均明显下调；锁阳组与模型组相比,无显著差异。续断组、鹿衔草和锁阳组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKL蛋白表达均高于假手术组,而阳性对照组与假手术组则无明显差异。以上结果见表6。 2.3续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPGmRNA表达的影响与假手术组相比,模型组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPGmRNA表达均明显下调。与模型组相比,鹿衔草组和阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPGmRNA表达明显上调；续断组、锁阳组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPGmRNA表达无显著差异。续断组、锁阳组较假手术组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPGmRNA表达显著下调；鹿衔草组和阳性对照组与假手术组相比,无显著性差异。以上结果见表7。 2.4续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞RANKLmRNA表达的影响模型组大鼠胫骨成骨细胞RANKLmRNA表达明显高于假手术组。续断组、鹿衔草以及阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞RANKLmRNA表达较模型组明显降低,锁阳组则无明显差异。与假手术组相比,续断组、鹿衔草、锁阳组以及阳性对照组均无显著性差异。模型组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKLmRNA表达高于假手术组。与模型组比较,续断组、鹿衔草组以及阳性对照组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKLmRNA表达均明显下调;锁阳组则无显著差异。续断组和锁阳组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKLmRNA表达均高于假手术组,而鹿衔草组、阳性对照组与假手术组则无明显差异。以上结果见表8。 3续断、鹿衔草和锁阳对去卵巢大鼠外周血血清中IL-1和IL-6含量的影响与假手术组相比,模型组大鼠外周血血清中IL-1、IL-6的含量显著增高。与模型组相比,鹿衔草组和阳性对照组大鼠外周血血清中IL-1、IL-6的含量显著降低,续断组IL-6的含量亦明显降低；锁阳组大鼠外周血血清中IL-1、IL-6的含量无显著差异。续断组、锁阳组较假手术组大鼠外周血血清中IL-1、IL-6的含量均显著增高,鹿衔草组的IL-6含量亦明显增高；鹿衔草组的IL-1的含量及阳性对照组的IL-1、IL-6含量与假手术组相比,均无显著性差异。以上结果见表9。与空白对照组相比,假手术组的上述指标均无显著性差异,从而排除了手术本身对实验的影响。结论 (1)续断、鹿衔草对卵巢切除所造成的高转换型骨质疏松症具有一定的治疗作用,而锁阳则无明显的作用。 (2)鹿衔草的作用环节是,其不仅能提高成骨细胞和骨髓基质细胞OPG的蛋白及其mRNA表达,而且能抑制RANKL的蛋白及其mRNA表达;并可降低外周血中IL-1、IL-6的水平,从而达到对骨质疏松症的治疗作用。 (3)续断的作用环节是其可降低RANKL的蛋白及其mRNA表达,从而使RANK与RANKL的结合减少,进而减少了骨的过度吸收；此外,其还对IL-6水平有一定的抑制作用。收起

关键词 : 卵巢切除骨质疏松症鹿衔草续断锁阳