中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 李维山东大学 2014年硕士导师: 李越中共81页

摘要 : 目前环境中超过99％的微生物仍然是不可培养的，这表明微生物资源潜力巨大。宏基因组测序技术的发展为我们提供了不依赖培养即可了解环境微生物的方法，但是基于培养的对微生物性状以及生理生化特性的研究，仍然是传统微生物分类依据，也是将丰富微生... 展开目前环境中超过99％的微生物仍然是不可培养的，这表明微生物资源潜力巨大。宏基因组测序技术的发展为我们提供了不依赖培养即可了解环境微生物的方法，但是基于培养的对微生物性状以及生理生化特性的研究，仍然是传统微生物分类依据，也是将丰富微生物资源运用到生产实践中必不可少的方法。本文分析了目前关于新型微生物的分离方法，发现特定的分离方法只对环境中的特定微生物类群有效，换句话说，定向分离特定环境微生物要根据其特性设计针对性实验。就粘细菌而言，除了具有分布广、丰都高、代时长等特点外，还具有显著的社会性，如生长的细胞密度依赖，群体运动，群体捕食等。鉴于粘细菌的这些特点，本文设计了微球包埋结合粘细菌助长的体系，尝试对环境中未知粘细菌进行分离筛选。在本文的工作中，我们建立了低熔点琼脂糖微球包埋的制备方法，得到直径在50-70μm间的微球，并在微球中包埋单个细胞，包埋比例约为1∶10。然后我们将制得的含有单细胞微球接种于由粘细菌作为助长菌的助长体系中，通过粘细菌间的相互促进作用，使球内的单细胞分裂为微菌落，再通过显微操作技术，直接选取成功获得微菌落的微球，进行后续测序及培养。在进行粘细菌间的包埋助长实验时，我们发现粘细菌间的确存在生长的相互促进作用，即被包埋的单个细胞在助长粘细菌的存在下可以分裂为菌落。这种促进作用在亲缘关系较近的粘细菌种群之间均可发生，且不依赖于接触。在进行土壤样品的包埋助长实验时，我们获得了约100株球内微菌落，但测序结果没有检测到粘细菌，推测由于土壤环境存在许多快速生长菌，导致生长缓慢的粘细菌在复杂环境中难以被发现。为了定向富集环境中的粘细菌，本文采用较为先进的拉曼技术尝试对环境中疑似粘细菌的杆状细胞进行富集后，在运用到包埋助长实验中。我们首先得到了6属13株不同粘细菌的拉曼光谱，通过与其它类群微生物比较，发现于1150cm-1及1503cm-1处存在粘细菌特有的条带，可以作为定向拉曼弹射环境疑似粘细菌的依据。我们共对约150个环境杆状细胞进行拉曼测试，得到10个含有1或2个特殊条带的细胞，经过单细胞基因组扩增和鉴定，结果显示没有检测到粘细菌，其中90％的细胞属于芽孢杆菌。因此在目前实验条件下，使用拉曼光谱和拉曼弹射技术对复杂环境（如土壤）中杆状细胞进行直接捕获的方法效率低，定向性差。但本文首次将拉曼光谱运用到复杂环境中进行特定微生物类群的分类与获取，这为研究者们探索新型微生物分离方法、甚至是新型微生物分类依据提供了思路。收起

关键词 : 粘细菌分离微球包埋粘细菌助长拉曼光谱分离筛选

2. 粘细菌Sorangium cellulosum NUST06产胞外多糖的代谢调控及其流变学性质的研究

[学位论文] 李冰南京理工大学 2004年硕士导师: 蒋鹏举;张建法共43页

摘要 : 粘细菌Sorangium cellulosum NUST06产生大量的胞外多糖.通过单因素实验确定了产糖的最佳发酵培养基:可溶性淀粉30g,磷酸二氢钾1.2g,,氯化钙0.1g,无水硫酸镁0.15g,硫酸亚铁0.01g,硝酸钠2.5g,水1000mL,pH7.0~7.5.最适培养条件:培养温度,28℃~30℃;摇床... 展开

关键词 : 粘细菌多糖制备流变学

3. 福鸽霉素结构鉴定及其发酵条件优化

[学位论文] 董国秀江南大学 2008年硕士导师: 陶文沂共48页

摘要 : 粘细菌(myxobacteria)是一类重要药源微生物类群。本论文在实验室前期研究工作的基础上，对粘细菌产生的次级代谢产物中抑瘤活性物质的分离和筛选、组成结构、培养条件优化、抑瘤活性物质的体内抑瘤活性等方面进行了较为深入的研究。以B16、SGC... 展开粘细菌(myxobacteria)是一类重要药源微生物类群。本论文在实验室前期研究工作的基础上，对粘细菌产生的次级代谢产物中抑瘤活性物质的分离和筛选、组成结构、培养条件优化、抑瘤活性物质的体内抑瘤活性等方面进行了较为深入的研究。以B16、SGC7901肿瘤细胞系为筛选模型，WXNXJ-C菌株发酵产物中有7个具有较高抗癌活性和较宽的抗肿瘤谱的物质。经C-18层析柱、15rpc柱、C-18制备柱等多次分离、纯化，采用LC/MS、MALDI-TOF、MS/MS、IR、NMR等分析技术对7F组分进行结构分析，得到分子量为424Da的C22H32O8，系统名称为[1R，7R,8R，10S，11S，12S，13S]-1，7，12，13-tetrahydroxy-14-methoxy-8，10-dimethyl-6-phenyl-5，15-dioxa-bicyclo[9.3.1]pentadecan-4-one；1，7，12，13-四羟基-14-甲氧基-8，10-二甲基-6-苯基-5，15-二氧-双环[9.3.1]十五烷4-酮)，起名为福鸽霉素(Phoxalone)。查新确证福鸽霉素是粘细菌WXNXJ-C产生的一种新的含有15元环的大环内酯化合物。通过建立移植黑色素瘤B16小鼠模型，初步考察了福鸽霉素的体内抗肿瘤活性。对荷瘤小鼠进行实体瘤称重，无论福鸽霉素纯品还是粗提物均有显著的抑瘤效果，其抑瘤率均在30％以上；样品作用组瘤体积生长速率比阴性对照组慢，且瘤体积小；同时能延长荷瘤小鼠的存活期，能增加荷瘤小鼠脾脏的重量及脾指数，也能一定程度地提高胸腺指数。HE染色表明福鸽霉素能使B16肿瘤细胞呈团索状实性排列或弥漫性分布，并有肿瘤细胞大片坏死。通过Plackett-Burman设计法筛选产福鸽霉素的主要影响因素为马铃薯淀粉、CaCl2和脱脂奶粉。采用Box-Behnken实验设计，通过响应面法对影响纤维堆囊菌SoceMWXAB-125产福鸽霉素的主要影响因子进行优化，当马铃薯淀粉、CaCl2、脱脂奶粉浓度分别为8.05g/L、2.72g/L、10.00g/L时，福鸽霉素产量最大预测值为120.46mg/L，在此条件下进行验证实验，实验结果表明，福鸽霉素的产量为119.98mg/L，较优化前产量(67.0mg/L)显著提高。收起

关键词 : 福鸽霉素粘细菌发酵条件

4. 粘细菌在农作地、程海湖及树皮中的分布及纤维堆囊菌遗传分析载体系统的初步分析

[学位论文] 常青山东大学 2003年硕士导师: 李越中共54页

摘要 : 该文以取自天然高碱性高原湖——程海湖附近的11个土样或朽木样进行粘细菌的分离,共得到8个属的40余株粘细菌.在全部的分离菌株中粘球菌的出现频率最高,堆囊菌次之.对这些分离菌株进行正常及高碱性条件下的生长实验,结果表明某些菌株仅在高碱性条件下... 展开

关键词 : 粘细菌农作地农业耕作行为程海湖高碱性溶细菌群粘细菌纤维堆囊菌

5. 粘细菌的分离鉴定及活性分析

[学位论文] 陶龙鑫内蒙古农业大学 2012年硕士导师: 刘惠荣共53页

摘要 : 粘细菌是一类革兰氏染色为阴性的单细胞细菌，具有复杂的多细胞行为，可以滑行运动，能产生多细胞的子实体和抗逆性强的粘孢子。其代谢产物具有丰富，多样，新颖的生物活性，是筛选天然药物的良好资源，具有很大的研究开发价值。本文分别以兔粪... 展开粘细菌是一类革兰氏染色为阴性的单细胞细菌，具有复杂的多细胞行为，可以滑行运动，能产生多细胞的子实体和抗逆性强的粘孢子。其代谢产物具有丰富，多样，新颖的生物活性，是筛选天然药物的良好资源，具有很大的研究开发价值。本文分别以兔粪法法和滤纸法对内蒙古部分地区采集的土壤样品进行粘细菌的分离，对分离的粘细菌进行子实体和菌落的形态观察、生理生化特征检测及分子鉴定，以确定这些菌株的真实分类地位。通过序列分析构建系统发育树，阐明所得粘细菌种属间的亲缘关系，并对分离的粘细菌菌株进行抗细菌和抗真菌的活性分析。本次研究共分离出67株细菌，其中66株具有粘细菌的形态特征，子实体颜色鲜艳，菌落形态各异。结合直接纯化与抗生素法纯化得到35株纯的粘细菌，经鉴定这些粘细菌菌株分属粘细菌的6个属，即：粘球菌属16株；珊瑚球菌属10株；原囊菌属3株；孢囊杆菌属2株；囊球菌属2株；纤维堆囊菌属2株。经16S rDNA序列分析可知，所有分离的粘细菌菌株与已知菌株的最高序列同源性均在98%以上。此外，本次实验获得1株细菌 wt-4，其菌落形态不同于粘细菌，经16S rDNA序列分析，发现这株细菌与鞘脂单胞菌(Sphingomonadaceae bacterium)最高序列同源性为94%，有可能为新的属，需要进一步研究鉴定。对分离的粘细菌进行抗细菌与抗真菌活性分析，结果显示：所得的35株粘细菌均表现出一种或多种指示细菌或真菌的抗菌活性，其中有23株粘细菌能抑制大肠杆菌的生长，17株能抑制枯草芽孢杆菌生长，18株粘细菌能抑制金黄色葡萄球菌生长，18株能抑制酿酒酵母的生长，31株粘细菌能抑制马铃薯晚疫病菌的生长，检测的所有粘细菌菌株对核盘菌和黑痣病菌均无明显的抑制作用。该工作的完成为内蒙古地区粘细菌的深入研究及新药研发奠定了基础。收起

关键词 : 粘细菌分离鉴定活性分析抗菌活性

6. 纤维素堆囊菌生长代谢的性质研究

[学位论文] 王溱圯山东大学 1998年硕士导师: 李越中共49页

摘要 : 纤维素堆囊菌属于粘细菌的溶纤维素群.它不但和其它粘细菌一样具有复杂的多细胞形态发生和细胞社会学行为,而且次级代谢产物异常丰富,因此,它可作为研究原核生物细胞分化、原核生物与真核生物进化关系的模式菌,同时在微生物新药开发研究中也是极好的替... 展开

关键词 : 粘细菌纤维素堆囊菌代谢

7. 耐盐粘球菌的社会学行为及其对海洋环境的适应策略

[学位论文] 王冰山东大学 2006年博士导师: 李越中共119页

摘要 : 粘细菌曾经被普遍认为是典型的陆生细菌，不能够在海水盐浓度下生长。然而随着研究的深入，人们利用分子生物学手段(16S rDNA文库技术)从许多海洋环境样品中检测到了粘细菌的存在。并从1998年开始，研究者从太平洋附近的海洋环境中越来越多的分离纯化... 展开粘细菌曾经被普遍认为是典型的陆生细菌，不能够在海水盐浓度下生长。然而随着研究的深入，人们利用分子生物学手段(16S rDNA文库技术)从许多海洋环境样品中检测到了粘细菌的存在。并从1998年开始，研究者从太平洋附近的海洋环境中越来越多的分离纯化出活的粘细菌菌株，“海洋粘细菌”的概念在国际上被认同并引起人们极大关注。根据耐盐能力的不同，海洋粘细菌通常被分为两类：海洋嗜盐粘细菌和海洋耐盐粘细菌，它们都能够在海洋环境条件下生存并繁殖，但是在形态、系统分类、生理生化特性以及生活模式上有很大差异。粘细菌以具有复杂的多细胞社会学行为著称，它们能够在营养丰富的条件下在固体表面上滑行运动；又能在饥饿的条件下聚集形成子实体结构以及抗逆性的粘孢子。粘细菌的社会学行为主要依赖于其双运动系统，包括Social motility(S运动)和Adventurous motility(A运动)两个运动系统。在柔软湿润的琼脂表面(0.3％琼脂浓度)上，主要表现S运动；在坚硬干燥的琼脂表面(1.5％琼脂浓度)上，主要表现A运动，并辅以少量S运动的协同作用。社会学行为的存在(主要体现在双运动系统的维持)使得粘细菌能够在各种各样复杂的生理和生态环境中生存繁殖。那么是否社会学行为的存在也给粘细菌在海洋环境中的适应生存提供了一个优势?海洋粘细菌是怎样适应海洋环境生存繁殖的?这成为一个令人感兴趣并且富有挑战性的课题。本文工作中，我们从多种海洋样品中分离纯化了多株海洋粘细菌，对它们进行了初步的形态学观察与分析之后，研究其在海水条件下的社会学行为及适应机制。在国际上首次揭示了海水条件下海洋粘细菌社会学行为变化的规律，并利用芯片技术从分子水平上研究该变化的机理，为理解社会学行为(主要是双运动系统的维持)在粘细菌适应海洋环境中的必要性与重要意义提供了重要信息。综合文献表明，海洋粘细菌在地球上的分布具有明显的区域特异性。目前除了印度洋附近没有海洋粘细菌的研究之外，太平洋附近分离纯化到大量的海洋嗜盐粘细菌和海洋耐盐粘细菌，而大西洋和北冰洋区域粘细菌的出现机率很小，至今为止仅利用16S rDNA文库构建方法检测到粘细菌的存在。本工作利用本实验室创立的海洋粘细菌分离纯化方法，对从中国沿海地区黄海、东海沿岸收集的多种海洋样品进行了分离纯化，获得了多株海洋粘细菌。通过对所分离的海洋粘细菌的形态学观察(包括菌落、营养细胞、子实体和粘孢子等)以及16S rDNA序列分析，发现其中82％都是Myxocus，推测这与Myxococcus具有包被非常厚荚膜的粘孢子相关，特殊的粘孢子形态结构使得Myxococcus比粘细菌中其他种属更能够适应海洋环境生存。所分离纯化的海洋粘细菌能够在较广泛的海水盐浓度范围下生长，且在淡水条件下生长的很好；另外形态学观察结果表明它们与陆生粘细菌非常相似，因此它们属于海洋耐盐粘细菌。根据耐盐能力的不同，我们将它们归为两小类：高耐盐粘细菌和微耐盐粘细菌。前者能够耐受100％海水浓度生长；后者最高仅能够耐受60％左右的海水浓度生长。海洋耐盐粘细菌的子实体发育具有特殊的形态。它们在适当的海水浓度条件下可以形成典型的粘细菌子实体结构，当海水浓度增加的时候，子实体形成能力退化，仅能形成扁平的屋脊状结构；并且某些高耐盐粘细菌在低海水浓度条件下(0％-10％海水浓度)也失去了子实体形成能力。利用经典的“软硬琼脂实验”对10株海洋耐盐粘球菌在海水条件下的社会学行为进行了表型上的观察，并在相差显微镜下观察这些菌株的细胞运动形态。研究发现，海水条件下不同耐盐粘球菌的双运动系统呈现不同的变化规律。对于高耐盐粘球菌，海水条件下其S运动和A运动都呈现增强的趋势，其中S运动的增强趋势更加明显和稳定：对于非耐盐粘球菌，海水对它们的S运动和A运动都表现出抑制作用；而对于微耐盐粘球菌，海水条件下，它们的S运动和A运动表现出不规律的变化，提示它们是非耐盐粘球菌和高耐盐粘球菌的一个中间过渡阶段。对于同一株耐盐粘球菌(如高耐盐粘球菌HW-1和152-2)，不同海水浓度对其S运动变化程度的影响不大，都是增强了S运动能力；而对于A运动的变化程度影响较明显，不同的海水浓度对A运动能力增强或者降低的变化程度影响各不相同。当环境中营养水平降低的时候(如在贫瘠培养基上)，双运动系统的能力都增强，S运动能力的增强尤其明显。以上结果表明，当粘细菌处于海水条件下时，它的双运动系统能力会表现出增强的现象以帮助细菌在海水环境下适应生存；当环境中营养水平降低的时候，双运动系统也表现出增强的现象，使得细菌能够共同协作度过难关。不管在何种情况下，S运动能力的增强都表现的尤为突出。为了研究耐盐粘球菌运动能力增强的机制，我们对S运动的主要运动器官IV型纤毛(Tfp)进行了透射电镜观察。结果发现，与淡水条件相比，海水条件下Tfb的形态和数量并没有明显的变化。表型的变化只是现象，只有通过基因表达变化的研究才有可能真正揭示耐盐粘球菌运动能力改变的本质。我们收集了所有已经报道的粘细菌运动相关基因，利用模式菌株Myxococcus xanthus DK1622基因组作为模板进行PCR扩增，制备了粘球菌运动相关基因的小型芯片。通过比较耐盐粘球菌模式菌株Myxococcusfulvus HW-1在淡水和海水条件下的表达谱，发现海水条件下所有运动相关基因的表达均有不同程度的增加，这与表型观察结果一耐盐粘球菌的运动能力增强相一致。另外筛选到表达发生显著改变的运动相关基因共7个，其中4个(aglS、aglR、cglB和agmE)是A运动相关基因；2个(pilG和pilA)是S运动相关基因；1个(mglB)是A运动和S运动共同必需的基因。分析结果表明，编码pilus结构亚单位的基因pilA在海水条件下表达显著上调，说明S运动能力的增强可能主要是由于pilus结构亚单位的增加引起的。由于TEM观察结果表明海水条件下Tfp在数量上没有明显增加，那么pilus结构亚单位的增加可能是因为细胞极性两端pili交替伸缩的频率增加引起，这其中涉及到Tfp)收缩能力的增强。另外其他表达差异基因的分析也有助于我们理解海水条件下耐盐粘球菌运动能力增强的原因。总之，实验结果表明海洋粘细菌的社会学行为(主要是双运动系统在进化上的维持)对于它们在海水环境中的生存和繁殖具有非常重要的意义。粘细菌具有社会学行为的能力是自然选择进化的结果，这有助于粘细菌在各种各样的生理生态环境中生存和发展。收起

关键词 : 粘细菌子实体耐盐粘球菌嗜盐粘细菌社会学行为双运动系统

8. 粘细菌内源性隐秘质粒pMF1存在机制研究

[学位论文] 陈晓静山东大学 2016年博士导师: 李越中共222页

摘要 : 粘细菌是一类特殊的细菌类群，具有复杂的细胞间协同行为和庞大的基因组。粘细菌基因组的典型特点是存在大量的基因复制和水平基因转移现象，比如Sorangium cellulosum So0157-2(14.78Mb)的基因组中近40％的基因可能来自水平转移，暗示了粘细菌基因组... 展开粘细菌是一类特殊的细菌类群，具有复杂的细胞间协同行为和庞大的基因组。粘细菌基因组的典型特点是存在大量的基因复制和水平基因转移现象，比如Sorangium cellulosum So0157-2(14.78Mb)的基因组中近40％的基因可能来自水平转移，暗示了粘细菌基因组易于整合外源DNA并进行染色体自我重组。整合外源DNA需要移动工具，比如质粒、噬菌体，但是，与其明显的基因组扩张相反的是，在粘细菌中并未发现普遍的质粒存在现象。pMF1,来自于Myxococcusfulvus124B02,是目前发现的唯一能在粘细菌细胞中自主复制的内源质粒。pMF1对于研究为何M.fulvus124B02能够包含内源质粒、质粒给M.fulvus124B02宿主带来的影响以及粘细菌基因组的进化具有重要意义。论文围绕粘细菌内源质粒pMF1的存在机制展开，主要研究内容与研究结果如下: 1、pMF1复制和分配遗传稳定区域功能模式分析。采用PEG6000沉淀法提取了M.xanthus DZ1 pZJY41的复制中间体，确定了pMF1的复制方式为theta型，这种方式是大部分革兰氏阴性细菌中质粒的复制方式。但是，与经典的repABC质粒的复制和分配方式不同，pMF1的复制和分配功能是由两个单独的操纵子负责(pMF1.13-pMF1.16,pMF1.21-pMF1.23)，基因结构、调控网络更复杂，对维持低拷贝质粒稳定存在的主动分配系统进行了更为深入的研究。pMF1质粒的par loci除了包含其他低拷贝质粒都含有的编码ATPase(pMF1.22,parA)、DNA-binding protein(pMF1.23,parB)的基因以及parS位点以外，还包含一个额外的基因(pMF1.21)，命名为parC。这与其他低拷贝质粒的主动分配系统有明显不同，暗示了pMF1质粒在完成复制进行分配时采用了一种新颖的方式。在论文的第二部分，对该基因进行了研究。 parC位于promoter和parA之间，并且与parA在序列上有4个碱基的重叠。这种序列上的组合方式暗示了parC可能具有某种功能。将parC进行全基因敲除后，重组质粒的稳定性下降到与pZJY41相似，对粘球菌宿主M.xanthus DZ1最大生长量的影响也显著下降，表明parC参与了par loci精确分配质粒和影响宿主生长的过程。融合荧光报告基因结果显示parC在粘球菌宿主中能正常表达成蛋白，是以蛋白质的形式发挥作用。通过与数据库进行比对并没有找到ParC在序列和结构上的同源蛋白。对其二级结构进行预测发现ParC含有大量的α螺旋，大约80％的氨基酸都形成了α螺旋。同源模建结果发现ParC形成一个发卡样的长螺旋，该长螺旋逆时针旋转成一个类似DNA超螺旋结构的右手螺旋。表面电势分析显示在长螺旋的顶端(N-端)广泛分布着一些带正电荷的氨基酸，而底部（C-端）则富含带负电荷的氨基酸。结合ParC形成三聚体的实验结果，可以总结出ParC螺旋利用半胱氨酸形成二硫键，组装成3个螺旋贴在一起的N-端带正电，C-端带负电的“棒状”结构。 pMF1的DNA-binding protein ParB是一个碱性蛋白，带正电荷，而细胞内的DNA是带负电荷的，ParC这种电荷的不均匀分布是否是为了与这两者相互作用呢？实验表明ParC确实能增强ParB与IrA(parS位点)的结合作用，但其本身与 ItA并不结合。而且ParC与ori(10953-13980)及par loci(17242-50)区均没有结合作用。体内和体外实验表明ParC与ParB之间也没有相互作用。在低拷贝质粒的分配过程中，第一步便是大量的ParB蛋白与parS结合，形成分配复合物，而的结果表明ParC不参与质粒分配的第一步。 pMF1质粒的复制和分配方式不同于其他低拷贝质粒，对其机制在做进一步研究。对于隐秘质粒来说，仅有完整的复制和分配功能不能保证其在宿主漫长进化过程中的稳定存在。接下来将研究目标扩展到整个质粒和宿主，从基因组学的角度研究质粒-宿主的进化历史。 2、pMF1质粒和宿主M.fulvus124B02基因组组学研究暗示了两者的共进化。对pMF1质粒上的23个基因所编码的蛋白分别进行功能来源预测，并归为四类。其中14个蛋白与粘细菌密切相关，质粒上约1/3（8个）的编码蛋白只能与M.stipitatus DSM14675比对到同源蛋白，另外，1个来自于Stigmatellaaurantiaca，1个来自于Anaeromyxobacter，1个来自于Chondromyces crocatus和Sorangium cellulosum，3个来自于粘细菌众多种属。9个pMF1蛋白在数据库中比对不到任何的同源蛋白，属于pMF1特有。但是，很多蛋白的功能仍然未知。转录组数据表明在23个基因中，转录水平最高的是pMF1.17,pMF1.18,其次是pMF1.12。链特异性转录组和RT-PCR结果表明pMF1包含6个操纵子，占全部基因比例的87％(20/23)。接下来对宿主M.fulvus124B02进行了基因组全测序，结果表明M.fulvus124B02包含一个环形染色体，大小为11,048,835 bp，以及一个环形质粒，也就是pMF1。染色体和质粒基因组的GC含量相似，分别为69.96％和68.7％。全基因组进化树和共线性比对表明M.fulvus124B02与M.stipitatus DSM14675同源性最高，二者在基因组大小上也最接近。与其他粘球菌相比，M.fulvus124B02的基因组有1-2 Mb的扩张，但其在直系同源和旁系同源基因比例上并没有明显差异。限制修饰系统和CRISPR-Cas系统比较分析发现，M.fulvus124B02的防御系统更加薄弱，其Cas蛋白操纵子比其他粘球菌要少1/2-2/3,记录外源DNA的spacers也少于其他同种或同属的粘细菌，限制修饰系统类型和修饰酶种类也较少。同源比对结果显示pMF1上的某些基因来自于其他粘细菌，暗示了pMF1曾经在不同粘细菌之间水平转移，而且与M.stipitatus DSM14675的同源基因最多。粘球菌属产生于47-51百万年前，而M.fulvus124B02与M.stipitatus DSM14675在大约41百万年前时由共同祖先分化而来，相对薄弱的免疫系统解释了为什么pMF1最终在M.fulvus124B02中保存下来，并与M.fulvus124B02共同进化，稳定存在。 3、pMF1在宿主M.fulvus124B02中发挥维持宿主基因组稳定的作用为了探明pMF1稳定存在于M.fulvus124B02中的机制，构建了质粒消除菌株，在实验室条件下模拟pMF1与宿主M.fulvus124B02的进化。利用质粒不相容原理可以将pMF1自M.fulvus124B02中消除，而且pMF1的消除没有显著影响宿主的生长、运动、发育等表型，说明pMF1对宿主的影响并不是短时间的表型影响。在进行实验室传代时，设定了三种培养条件，分别以丰富的CYE、贫瘠的dead cells和捕食性的living cells为食物来源。结果发现只有在以贫瘠的dead cells为营养时，pMF1能稳定存在，而在其他两种条件下传代的菌株中，pMF1在7-8周时便检测不到。为了找到影响pMF1稳定存在的相关基因，对三种条件传代的菌株进行测序，对筛选出的基因进行敲除，重复传代实验，最终确定了可能相关的一些基因。筛选到了pMF1稳定存在的实验室条件，在该条件下，对经过较长时间共进化的菌株进行表型分析时发现不携带质粒的菌株其发育能力下降程度要明显高于携带质粒的菌株，CYE平板上的124B02/free菌株甚至由聚团生长变成分散生长，暗示了pMF1对宿主的影响可能是经过长时间的逐渐积累。为了验证这一猜想，对进化菌株进行基因组测序，结果表明124B02/free菌株的基因组突变率要明显高于124B02/4111和124B02/pMF1菌株，pMF1或者pZJY4111质粒的存在能降低基因组突变率，而且这些突变的发生是随机的，没有基因组位置和基因功能的偏好性。pMF1和pZJY4111的共同部分是质粒的ori和par loci，而pZJY4111质粒在进化传代过程中ori被宿主剪切，只剩下par loci的现象表明可能是par loci发挥了稳定基因组，防止基因组发生突变的作用。综上所述，pMF1的发现，不仅成功解决了粘细菌的遗传操作问题，同时为了解粘细菌基因组进化提供了指导。据此，推测了pMF1隐秘质粒稳定存在的机制模型。在粘细菌的进化历史过程中，做为基因移动的载体，pMF1曾经在粘细菌之间水平转移。由于结构简单、拷贝数高，质粒被认为是快速的基因进化器，可以加速宿主基因组的进化。由于具有相对较弱的免疫防御系统，pMF1更容易进入M.fulvus124B02宿主细胞内。pMF1通过参与宿主基因组的错配修复过程，最终被M.fulvus124B02需要而保存下来。收起

关键词 : 粘细菌 pMF1质粒分配遗传基因突变

9. 放线菌和纤维粘细菌对纤维素降解机理的研究

[学位论文] 李宪臻山东大学 1996年博士导师: 高培基共175页

摘要 : 由土壤中分离到放线菌Streptomyces sp.LX和纤维粘细菌Cytophaga sp.LX-7 两个菌株,详细研究了它们的生理生化特征,作了分类鉴定,并对其纤维素降解过程作了较深入的研究.

关键词 : 放线菌纤维粘细菌纤维素降解

10. 盐土环境粘细菌的分离、系统发育学及生物活性物质

[学位论文] 张建法南京大学 2002年博士导师: 刘志礼共117页

摘要 : 通过对两株盐土粘细菌的系统发育的研究表明,盐土来源的粘细菌比较其它的粘细菌有独特的遗传特征,表明在粘细菌Sorangiumcellulosum分类上存在着形态结构与系统发育的不相关性.结果还说明在这些粘细菌中,糖类物质影响粘细菌细胞的聚集发育和子实体的形... 展开

关键词 : 盐土环境粘细菌系统发育生物活性