中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

1. 皮肤分支杆菌感染一式多元化快速分子诊断方法的研究及其在临床中的应用

[学位论文] 王洪生北京协和医学院(中国医学科学院) 2005年博士导师: 吴勤学共135页

摘要 : 　　随着艾滋病和其他免疫缺陷患者的增多，分支杆菌感染的发病率也逐渐上升。分支杆菌既可以引起系统性感染，也可以引起皮肤感染。皮肤分支杆菌感染的临床表现和组织病理都缺乏特异性，诊断主要依靠检测到分支杆菌。本实验室已经针对常见的几种可以... 展开

关键词 : 分支杆菌皮肤感染分子诊断免疫缺陷患者

2. 部分细胞因子在SLE病人肾脏和PBMC中的基因表达及其对BXSB小鼠的影响

[学位论文] 杨高云北京大学 1995年博士导师: 李世荫;姜学义共130页

摘要 : 为了进一步了解某些细胞因子在SLE中的变化及其对该病的发病影响和SLE中部分细胞、组织的凋亡情况,作者用分子生物学方法,细胞、组织学方法和动物模型蛋白给药、基因给药等方法做了试验工作.结果表明,作者认为B细胞刺激因子IL-1、IL-6、IL-10在SLE的发... 展开

关键词 : 细胞因子 SLE 肾脏基因表达

3. 8-MOP/UVA对人类皮肤光老化形成的影响及芳维A酸乙酯拮抗作用研究

[学位论文] 刘仲荣第三军医大学 2001年博士导师: 刘荣卿共128页

摘要 : 皮肤光老化目前缺乏可靠实用的人体模型.出现皮肤过早老化外观是皮肤科临床上补骨脂素长波紫外线光化学疗法(PUVA)的主要副作用.8-MOP/UVA的共同作用可能为研究皮肤光老化提供良好的体内外模型,但其分子生物学机制尚不清楚.该课题以PUVA治疗寻常型银屑... 展开

关键词 : 皮肤光老化成纤维细胞细胞衰老线粒体DNA 突变芳维A酸乙酯拮抗作用

4. 系统性红斑狼疮患者TH2型细胞因子受体表达及其基因多态性的研究

[学位论文] 姚煦北京协和医学院(中国医学科学院) 2004年博士导师: 李文忠共126页

摘要 : 目的:初步研究三种Th2型细胞因子受体(IL-4R,IL-6R,IL-10R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其潜在的临床意义,并探讨部分Th1和Th2型细胞因子受体基因多态性与SLE疾病易感性的关系.结论:Th2型细胞因子受体(IL-4R,IL-6R,IL-10R)的异常高表达可... 展开

关键词 : 系统性红斑狼疮细胞因子受体表达基因多态性

5. 基于m6A调控基因建立免疫浸润相关的黑色素瘤预后模型及黑色素瘤中miR-195-5p/YTHDF1的功能和分子机制研究

[学位论文] 林怡彤吉林大学 2022年博士导师: 李福秋共124页

摘要 : 黑色素瘤是恶性程度最高、预后最差皮肤肿瘤，也是发病率增长最快的肿瘤之一，具有很强的侵袭能力，但目前尚无有效的治疗方法，因而筛选黑色素瘤预后相关的特征基因及构建预后风险模型对黑色素瘤而言十分必要。YTH N6-甲基腺苷（N6-Methyladenosine,... 展开黑色素瘤是恶性程度最高、预后最差皮肤肿瘤，也是发病率增长最快的肿瘤之一，具有很强的侵袭能力，但目前尚无有效的治疗方法，因而筛选黑色素瘤预后相关的特征基因及构建预后风险模型对黑色素瘤而言十分必要。YTH N6-甲基腺苷（N6-Methyladenosine,m6A）RNA结合蛋白（YTHDF1）属于m6A阅读蛋白，在多种肿瘤的发生发展中作为促癌基因发挥调控作用。MicroRNAs（miRNA）是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码RNA，广泛存在于真核生物体中，参与机体多种生物学过程，miR-195-5p在多种肿瘤细胞中表达异常，作为抑癌基因发挥作用。但是miR-195-5p与YTHDF1在黑色素瘤中如何影响肿瘤的生物学行为，以及二者之间的相互作用，目前尚无文献报道。研究目的： 1.确定黑色素瘤中m6A调控基因的遗传标记和预后价值，基于m6A调控基因构建免疫浸润相关的黑色素瘤预后模型。 2.明确YTHDF1对黑色素瘤生物学行为的影响，探索miR-195-5p靶向YTHDF1对黑色素瘤细胞增殖、细胞周期进程以及凋亡能力的影响。研究方法： 1.从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中获得黑色素瘤患者的mRNA基因表达谱、拷贝数变异（CNV）、单核苷酸多态性（SNP）数据，从GEO数据库中获得黑色素瘤患者的mRNA基因表达谱。通过生物信息学方法分析m6A调控基因在黑色素瘤中的变异情况及其和患者预后的关系，采用多因素回归方法为黑色素瘤患者构建m6A评分模型，通过单因素和多因素Cox分析鉴定该模型的预后价值。基于m6A调控基因表达谱进行无监督聚类分析确定不同临床特征的分子亚型，根据m6A相关特征基因建立新的预后模型，通过测试集和外部验证集确定了该模型的预后价值。 2.将GSE112509数据集中样本分为YTHDF1低表达组和YTHDF1高表达组，差异分析确定两组间差异表达基因，并对其进行GO和KEGG通路富集分析，并通过Pearson相关性分析获取与YTHDF1表达密切相关的基因。二者取交集后得到与YTHDF1相关的差异表达基因，构建蛋白互作网络、筛选枢纽基因，确定YTHDF1下游潜在靶基因。利用GEPIA和TCGA数据库分析正常皮肤和黑色素瘤组织间YTHDF1与AURKA的表达差异；Kaplan-Meier方法绘制YTHDF1与AURKA高、低表达状态下患者总体生存曲线。选取黑色素瘤细胞A375，A875与人表皮黑色素细胞HEM-L，运用qRT-PCR与Western blot检验YTHDF1在三种细胞中的表达水平。分别建立YTHDF1过表达和敲低的A375细胞系，运用CCK-8检测细胞的增殖、克隆形成实验检测细胞的集落形成、流式细胞术检测凋亡情况、细胞周期进程，平板划痕实验与transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力；并通过qRT-PCR与Western blot实验检测YTHDF1对AURKA的表达影响。 3.利用生物信息学方法确定YTHDF1的上游miRNA，Pearson相关性分析验证二者的表达相关性，应用双荧光素酶报告实验鉴定二者结合能力。在A375，A875与HEM-L细胞中通过qRT-PCR检测miR-195-5p的表达水平。使用miR-195-5p mimics与inhibitor转染A375细胞，应用qRT-PCR与western blot方法，检测miR-195-5p对YTHDF1的表达影响。最后通过miRNA回复实验检测miR-195-5p通过靶向YTHDF1影响细胞增殖，细胞周期进程，与细胞凋亡的过程。研究结果： 1.黑色素瘤中m6A调控基因存在着高度的基因组变异，基因组变异频率越高的患者预后越差（p＜0.01）。通过单因素Cox回归分析m6A调控基因的表达，发现四种m6A调控基因与患者预后密切相关，分别为：YTHDF1，METTL14，WTAP，RBM15。采用多因素回归方法建立风险评分模型（m6AScore），单因素与多因素Cox分析结果显示，m6AScore与黑色素瘤患者的预后显著相关。对m6A调控基因表达谱进行无监督聚类分析，鉴定出三个临床类型不同的分子亚组，包括降解增强亚组和免疫增强亚组，它们之间的预后具有显著性差异（p=0.046）。根据差异基因表达谱识别出m6A相关特征基因，并建立新的预后模型，可以有效识别免疫浸润增强的预后不良的样本，并在芯片数据集GSE65904与GSE22153中得到验证。 2.生信分析确定AURKA为YTHDF1的下游靶基因，GO和KEGG通路富集分析显示AURKA广泛参与了与细胞增殖、细胞周期相关的过程。通过TCGA和GEPIA数据库分析发现在黑色素瘤组织中YTHDF1与AURKA的表达明显升高。Kaplan-Meier生存曲线分析显示YTHDF1与AURKA高表达的患者相比于低表达患者总体生存率更低。与HEM-L细胞相比，A375，A875中YTHDF1mRNA与蛋白水平明显增高。YTHDF1过表达的A375细胞，其增殖能力增强，细胞周期进程加速，凋亡现象减少，迁移侵袭能力增强；抑制YTHDF1表达的A375细胞，细胞增殖能力被抑制，细胞周期进程被阻滞在G0/G1期，凋亡现象增加，迁移侵袭能力减弱。YTHDF1的过表达可以增加AURKA mRNA与蛋白表达水平，抑制YTHDF1的表达减少了AURKA mRNA与蛋白表达水平。 3.生信分析发现miR-195-5p为YTHDF1的上游调控基因，Pearson相关分析显示二者之间为明显负相关，荧光素酶报告实验显示miRNA-195-5p可以直接靶向结合YTHDF13’UTR区。A375，A875细胞中miR-195-5p呈现低表达。抑制miR-195-5p能够上调YTHDF1表达，而过表达miR-195-5p则显著抑制了YTHDF1的表达。回复实验证实在A375细胞中miR-195-5p通过靶向YTHDF1抑制细胞增殖与细胞周期的进程，促进细胞凋亡。研究结论： 1.黑色素瘤患者中m6A调控基因存在高度变异，其表达水平与变异水平同临床不良预后相关。基于m6A调控基因表达谱对样本进行无监督聚类分析，鉴定出降解增强和免疫增强的分子亚组。根据差异基因表达谱识别出m6A相关特征基因，并建立免疫浸润相关的预后模型。 2.皮肤黑色素瘤组织中YTHDF1、AURKA的表达升高，其高表达与黑色素瘤患者临床不良预后密切相关。YTHDF1可能通过AURKA促进黑色素瘤细胞的增殖，加速细胞周期进程，并抑制细胞的凋亡，促进细胞迁移、侵袭，增加黑色素瘤细胞的恶性度。 3.miR-195-5p通过调控YTHDF1在黑色素瘤细胞中的表达，抑制黑色素瘤细胞增殖和细胞周期进程，促进细胞凋亡。收起

关键词 : 皮肤黑色素瘤预后模型 N6-甲基腺苷微小RNA-195-5p YTHDF1蛋白生物学行为

6. Hedgehog信号通路在银屑病发病中的机制研究

[学位论文] 曹华莉浙江大学 2015年博士导师: 郑敏共123页

摘要 : 背景: 银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，在全世界范围内累及人数大于125，000，000人，其发病机制复杂，包括角质形成细胞的增生和异常分化，显著的炎症浸润等。其中表皮角质形成细胞的过度增生由一系列细胞因子及信号通路激活，这些刺激因... 展开背景: 银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，在全世界范围内累及人数大于125，000，000人，其发病机制复杂，包括角质形成细胞的增生和异常分化，显著的炎症浸润等。其中表皮角质形成细胞的过度增生由一系列细胞因子及信号通路激活，这些刺激因素又来源于免疫细胞以及角质形成细胞本身。 Hedgehog(Hh)信号通路不仅在胚胎发育以及成人的内稳态维持中发挥重要作用，其异常活化也导致了一系列疾病的产生，包括基底细胞癌、胰腺癌、成视网膜细胞瘤以及髓母细胞瘤等。在生理性Hh信号通路传导过程中，Hh配体结合细胞表面受体Patched1(PTCH1)，从而解除对Smoothened(SMO)的抑制作用。SMO的活化导致一系列细胞内事件的发生，通过转录因子GLI家族(GLI1、GLI2、GLI3)导致靶向基因表达的变化。在缺少Hh配体时，PTCH1抑制SMO的活动，从而使得转录因子GLI在纤毛内降解为抑制体的形式。其降解过程需要suppressor of fused(Sufu)和kinesin family member7(Kif7)的参与。哺乳动物的Hh配体包括三种，分别为Sonichedgehog(Shh)、Indian hedgehog(Ihh)和Desert hedgehog(Dhh)，其中Shh是皮肤中主要的Hh配体。以往的研究发现Hh信号通路在银屑病皮损区是被激活的，使用Hh通路的抑制剂环巴胺后能导致皮损的快速消退。但是，又有研究表明在银屑病皮损区中并没有Hh转录因子mRNA水平上的升高。因此，Hh信号通路是否在银屑病中过度激活以及其在银屑病发病机制中的作用仍需要进一步的研究。目的: 明确Hh信号通路中的各个分子在银屑病皮肤组织皮损区角质形成细胞中的表达情况，并在体外培养的原代人表皮角质形成细胞中使用重组人细胞因子SonicHedgehog激活以及SMO的抑制剂环巴胺抑制Hh信号通路后观察细胞的增殖、凋亡、细胞周期变化、衰老、活性氧族的产生、迁移以及分化等功能变化;以及环巴胺在体外对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型的作用。方法: 第一部分:切取正常人以及银屑病病人皮损区皮肤，并分离出表皮，分离、培养正常人表皮角质形成细胞，提取总RNA和蛋白质。以逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcript polymerase chain reaction，RT-PCR)检测正常人以及银屑病病人皮损区皮肤组织全皮、表皮以及表皮角质形成细胞Hh信号通路中各个分子的mRNA表达水平;以Western-blot法检测正常人以及银屑病病人皮损区表皮角质形成细胞Hh信号通路中各个分子的蛋白表达水平;以间接免疫荧光法对Hh信号通路中各个分子在正常人以及银屑病病人表皮中的表达进行定位;用酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）检测正常人以及银屑病病人外周血血清中Hh通路的三种配体Shh、Ihh以及Dhh的浓度水平。第二部分:使用外源性Sonic Hedgehog细胞因子以及Hh通路的抑制剂环巴胺处理体外培养的人表皮角质形成细胞，观察细胞增殖、凋亡、细胞周期变化、衰老、活性氧族的产生、迁移以及分化等功能变化。另外使用慢病毒感染人角质形成细胞使其过表达Hh通路的抑制因子Sufu后观察Hh通路GLI转录因子在mRNA、蛋白水平以及亚细胞定位中的变化，并进一步观察与角质形成细胞分化相关的蛋白表达水平变化。第三部分:体外用咪喹莫特诱导C57BL/6小鼠形成银屑病模型，并用不同浓度的环巴胺腹腔注射小鼠，通过PASI评分以及H&E染色观察其对银屑病皮损形成的抑制作用。结果: 一、银屑病中Hh通路在mRNA水平上的激活: 1.银屑病病人皮损区表皮中GLI3的mRNA表达与正常人相比显著降低; 2.银屑病病人皮损区全皮中Sufu的mRNA表达与正常人相比显著降低; 3.体外培养的银屑病病人皮损区表皮角质形成细胞中GLI3的mRNA表达与正常相比显著降低，而Shh、GLI1、Sufu的mRNA表达无显著差异。二、银屑病中Hh通路在蛋白水平上的激活: 1.银屑病病人外周血血清中Shh、Ihh和Dhh浓度与正常人相比显著升高; 2.体外培养的银屑病病人皮损区角质形成细胞中GLI3、SUFU、PTCH1和PTCH2蛋白表达与正常相比显著降低，GLI2略有升高，但差异不显著，Shh和GLI1无显著差异; 3.免疫荧光检测结果发现，银屑病病人皮损区以及正常人表皮各层均有GLI1、GLI2和GLI3的表达，其中GLI3在银屑病皮损区表皮和正常人中的分布明显不同，在银屑病表皮中GLI3主要位于胞浆中，而正常表皮中GLI3主要位于胞核内。体外培养的银屑病病人皮损区角质形成细胞中GLI3主要位于胞浆中，而在正常人角质形成细胞中GLI3主要位于胞核内。三、重组人Shh刺激体外培养人表皮角质形成细胞引起的功能变化: 1.重组人Shh剂量依赖性地促进角质形成细胞中GLI1的mRNA转录，但对Sufu及GLI3的mRNA转录无明显作用; 2.重组人Shh剂量依赖性地促进角质形成细胞的增殖; 3.重组人Shh促进角质形成细胞中活性氧族的产生。四、环巴胺作用于体外培养人表皮角质形成细胞引起的功能变化: 1.环巴胺剂量依赖性地抑制角质形成细胞的增殖; 2.环巴胺剂量依赖性地促进角质形成细胞的凋亡，而重组人Shh显著抑制角质形成细胞的凋亡; 3.环巴胺导致角质形成细胞G1期的阻滞，而TNF-α能逆转环巴胺的G1期阻滞作用; 4.体外培养的银屑病病人皮损区角质形成细胞衰老程度显著低于正常人;环巴胺能显著促进细胞衰老，丙酸氯贝他索能显著减少细胞衰老;TNF-α对细胞衰老无明显作用，而环巴胺能显著逆转丙酸氯贝他索导致的抗衰老作用; 5.环巴胺能显著降低角质形成细胞的活性氧族产生，丙酸氯贝他索亦能显著降低细胞活性氧族产生;TNF-α能显著增加细胞活性氧族的产生，环巴胺能显著抑制TNF-α对活性氧族的促进作用; 6.环巴胺能显著抑制角质形成细胞的迁移，Shh能显著促进细胞迁移，丙酸氯倍他索能显著抑制细胞迁移，TNF-α对细胞迁移无明显作用。五、体外培养人表皮角质形成细胞Sufu过表达引起的功能变化: 1.人表皮角质形成细胞中mRNA及蛋白水平均验证了Sufu过表达的效率; 2.人表皮角质形成细胞中Sufu过表达后GLI1和GLI2的蛋白表达均降低了; 3.银屑病病人皮损区表皮角质形成细胞中Sufu过表达后与分化相关的蛋白表达升高了; 4.银屑病病人皮损区表皮角质形成细胞中Sufu过表达后GLI3由胞浆转移至胞核内。六、环巴胺减轻了小鼠模型中银屑病皮损的形成: 1.环巴胺降低了小鼠模型中银屑病皮损的PASI评分; 2.H&E染色表明环巴胺减轻了咪喹莫特诱导的小鼠银屑病皮损的严重程度。结论: 一、银屑病中Hh通路在mRNA及蛋白水平上均被激活了; 二、Shh能促进角质形成细胞的增殖，抑制角质形成细胞凋亡，显著增加角质形成细胞活性氧族的产生，促进细胞迁移，从而证明Hh通路的激活在银屑病的发病中的作用; 三、环巴胺能抑制角质形成细胞的增殖，可能与其促进细胞凋亡及阻滞细胞周期相关;环巴胺能促进细胞衰老，抑制活性氧族的产生并抑制细胞迁移能力;从而证明了阻断Hh通路对抑制银屑病发病的分子机制; 四、Sufu过表达能抑制角质形成细胞中Hh通路的激活，进而促进银屑病表皮角质形成细胞的分化; 五、环巴胺能抑制咪喹莫特诱导的小鼠模型中银屑病皮损的形成，从而为应用Hh通路抑制剂临床治疗银屑病提供了可能。收起

关键词 : Hedgehog通路银屑病角质形成细胞环巴胺抑制发病机制

7. 皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)免疫表型、基因型及其发病机制的研究

[学位论文] 张春雷北京大学 1995年博士导师: 李世荫;沈力共124页

8. 肾足细胞内补体激活通过内皮素系统介导三氯乙烯致免疫性肾损伤机制研究

[学位论文] 王国秀安徽医科大学 2020年博士导师: 朱启星共114页

摘要 : 研究背景三氯乙烯(trichloroethylene，TCE)是一种卤代烃类有机溶剂，在工业上广泛用作金属清洗剂和溶脂剂等。在中国，每年至少有2万名新工人受到TCE暴露的威胁。工人可通过皮肤和呼吸系统接触三氯乙烯感染职业性三氯乙烯药疹样皮炎(occupatio... 展开研究背景三氯乙烯(trichloroethylene，TCE)是一种卤代烃类有机溶剂，在工业上广泛用作金属清洗剂和溶脂剂等。在中国，每年至少有2万名新工人受到TCE暴露的威胁。工人可通过皮肤和呼吸系统接触三氯乙烯感染职业性三氯乙烯药疹样皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene，ODMLT)，引起多器官的免疫性损伤。该病病情凶险，病死率较高，临床表现除皮肤损害、发热、肝脏损害和浅表淋巴结肿大外，肾脏损害也是其重要临床表现之一,肾功能衰竭是导致ODMLT患者死亡的主要原因之一，研究TCE致免疫肾损伤的分子机制对于预防和治疗ODMLT具有重要意义。 ODMLT通常被认为是抗原特异性T淋巴细胞介导的Ⅳ型变态反应。然而，近年来越来越多的研究表明，仅用Ⅳ型变态反应不能完全解释ODMLT的发病机理，尤其是其引起多脏器严重损伤的机制。临床和动物实验研究发现，补体系统在TCE致敏诱导的多器官免疫性损伤中也发挥了重要的作用。补体系统主要通过经典激活途径(Classical pathway, CP)，凝集素活化途径(Lectin pathway, LP)，和旁路激活途径(alternative pathway, AP)三个途径被激活，这些途径均导致中心组分补体C3裂解成生物活性片段C3a和C3b。本课题组前期研究发现，TCE经皮致敏小鼠后其肾脏肾小球中补体C3的沉积量明显增加，提示TCE致敏后肾脏局部产生的补体被激活。那么，TCE致敏后肾脏局部补体系统的激活是否介导肾脏的免疫损伤？其作用的具体分子机制是什么？大量研究证实，补体激活与内皮素-1(endothelin-1，ET-1)信号系统相关，补体系统和内皮素系统的同时活化在许多实验模型和临床病例中都有报道。而内皮素-1是肾脏损伤的标志，不仅可以作为重要的促炎症因子，诱导TNF-α、IL-1β、ICAM-1等炎性细胞因子的分泌，导致肾脏的炎症损伤；同时，内皮素-1可以通过与主要在肾脏内皮细胞上表达的内皮素B型受体(Endothelin type B receptor, ETBR)结合，介导内皮型一氧化合成酶(Endothelial nitric oxide synthase，eNOS)系统功能受损，减少NO的合成，引起ET-1/NO动态平衡失调，导致内皮细胞功能障碍，进而加重肾脏损伤。因此我们推测，TCE致敏引起的肾脏局部补体的激活，可通过进一步活化内皮素系统介导肾脏的炎症反应和肾脏内皮细胞功能障碍，进而导致肾脏的免疫损伤。研究目的建立TCE经皮致敏小鼠模型，分别采用拮抗补体激活的CatLi，及ETBR的特异性抑制剂BQ-788对TCE致敏小鼠进行预处理，探讨TCE致敏后肾脏局部补体的激活通过内皮素系统介导肾脏免疫性损伤的具体分子机制。本项目的研究结果将进一步丰富TCE致敏引起的免疫性肾损伤的复杂作用机理，为防治ODMLT免疫性多器官损伤提供理论依据。第一部分肾足细胞内补体激活促进内皮素分泌和炎症反应介导三氯乙烯致免疫性肾损伤研究方法建立TCE经皮致敏BALB/c小鼠模型，使用能拮抗补体激活的CatLi进行预处理，采用免疫组化(Immunohistochemistry，IHC)和免疫荧光(Immunofluore-scence，IF)法检测各组小鼠肾组织中C3、C3a的表达和组织定位，分别采用检测试剂盒和苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)检测各组小鼠肾功能和肾组织病理学改变，分别采用RT-PCR、IHC、ELISA法检测小鼠肾组织中ET-1的mRNA和蛋白表达，IHC法检测各组肾组织中TNF-α，IL-1β，ICAM-1等炎症细胞因子的表达情况，并采用Westernblot法检测各组小鼠肾组织中NF-κBp65和p38MAPK炎症信号通路的蛋白表达水平，探讨TCE致敏后肾脏局部补体的激活通过促进ET-1分泌及其相关炎症因子的释放，介导肾脏免疫性损伤的分子机制。结果 1.各组小鼠致敏情况空白对照组和溶剂对照组小鼠分别5只，其背部皮肤都没有水肿和红斑，致敏评分都为0，致敏率均为0.00%；TCE处理组小鼠共20只，其中有8只小鼠致敏评分≥1，12只小鼠致敏评分为0，致敏率为40.00%；TCE+CatLi联合处理组小鼠共20只，其中7只小鼠致敏评分≥1，13只小鼠致敏评分为0，致敏率为35.00%。 2.各组小鼠肾组织中补体C3、C3a的沉积 IHC法检测补体C3和C3a在小鼠肾组织中的沉积情况。检测结果显示，空白对照组、溶剂对照组以及TCE未致敏组、TCE+CatLi未致敏组小鼠肾组织中无明显C3和C3a沉积；与溶剂对照组相比，补体C3和C3a在TCE致敏小鼠肾组织的沉积量显著增加(P<0.05)，且主要在肾小球中表达。经CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组小鼠肾组织中C3和C3a的沉积量较TCE致敏组明显减少(P<0.05)。这些数据表明，TCE致敏小鼠肾小球中的补体系统被激活，而CatLi能有效抑制肾脏中补体系统的活化。 3.各组小鼠肾组织中补体C3、C3a的定位免疫荧光双染色法检测肾脏中C3(C3a)和Nephrin(肾足细胞标志蛋白)的共定位。空白对照组小鼠肾小球中未见明显C3和C3a沉积；而在TCE致敏组小鼠肾小球中，Nephrin表达阳性的足细胞中可以检测到大量C3和C3a。结果表明，TCE致敏小鼠肾脏补体的激活主要定位于肾小球足细胞。 4.各组小鼠的肾功能检测血清Cr和BUN是反映肾功能的检测指标。检测结果显示，空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组肾功能无显著差异(P>0.05)；与溶剂对照组相比，TCE致敏组小鼠血清Cr和BUN水平显著升高(P<0.05)；经CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组小鼠血清Cr和BUN水平较溶剂对照组虽有所升高，但与TCE致敏组相比明显下降(P<0.05)。结果说明，TCE致敏后出现肾功能损伤，而CatLi通过拮抗肾足细胞内补体的活化，改善了TCE致敏小鼠损伤的肾功能。血清Cys-C和尿微量白蛋白/肌酐(Albumin-creatinin ration，ACR)水平反映肾小球滤过功能。检测结果显示，空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组间肾小球滤过功能无显著差异(P>0.05)；与溶剂对照组相比，TCE致敏组小鼠血清Cys-C和尿ACR水平显著升高(P<0.05)；经CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组血清Cys-C和尿ACR水平与TCE致敏组相比显著下降(P<0.05)。结果表明，TCE致敏后小鼠肾脏肾小球滤过功能受损，而CatLi通过拮抗足细胞内补体的活化，改善了TCE致敏小鼠受损的肾小球滤过功能。 5.各组小鼠肾脏病理学检测采用HE染色检测各组小鼠肾脏病理损伤情况。病理检查发现，空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组小鼠肾组织结构清晰、正常；TCE致敏组小鼠肾组织可见明显的炎性细胞浸润、细胞肿胀，可见空泡样病变和肾小球肥大；TCE+CatLi致敏组小鼠肾组织病理损伤程度与TCE致敏组相比明显减轻，肾小球大小甚至恢复正常。 6.各组小鼠肾组织中ET-1的mRNA和蛋白表达首先采用实时定量PCR法检测各组小鼠肾组织中ET-1的mRNA水平。检测结果显示，肾组织中ET-1的mRNA水平在空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组、TCE+CatLi未致敏组间无显著差异(P>0.05)；TCE致敏组小鼠肾组织中ET-1的mRNA水平显著升高(P<0.05)；CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组肾组织中ET-1mRNA水平与TCE致敏组相比明显降低(P<0.05)。采用IHC、ELISA法检测各组小鼠肾组织中ET-1的蛋白水平。IHC染色显示，空白对照组、试剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组小鼠肾组织中ET-1的蛋白沉积均较少，且无显著性差异(P>0.05)；而TCE致敏组肾组织中ET-1的蛋白沉积量明显增多(P<0.05)；经CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组肾组织中ET-1的蛋白沉积量较TCE致敏组明显减少(P<0.05)。ELISA结果也显示，小鼠肾组织中ET-1含量在空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组间无显著差异(P>0.05)；与溶剂对照组相比，TCE致敏组肾组织中ET-1含量显著升高(P<0.05)；经CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组小鼠肾组织中ET-1含量明显降低(P<0.05)。 7.各组小鼠肾组织中炎性细胞因子的表达 7.1各组小鼠肾组织中TNF-α的沉积 IHC检测结果显示，空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组小鼠肾组织中TNF-α的蛋白沉积较少，且差异无统计学意义(P>0.05)；而TCE致敏组小鼠肾组织中可见TNF-α的蛋白沉积量显著增多(P<0.05)；尽管TCE+CatLi致敏组肾组织中TNF-α的蛋白沉积量较溶剂对照组也有所增多(P<0.05)，但与TCE致敏组相比，其肾组织中TNF-α的蛋白沉积量显著减少(P<0.05)。 7.2各组小鼠肾组织中IL-1β的沉积 IHC染色显示，空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组小鼠肾组织IL-1β蛋白沉积较少，且无显著差异(P>0.05)；TCE致敏组肾组织中IL-1β的蛋白沉积显著增多(P<0.05)；而经CatLi预处理后，IL-1β在TCE+CatLi致敏组小鼠肾组织中的蛋白沉积量较TCE致敏组明显减少(P<0.05)。 7.3各组小鼠肾组织中ICAM-1的沉积 IHC染色显示，空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和TCE+CatLi未致敏组小鼠肾组织中ICAM-1的蛋白沉积较少，且差异无统计学意义(P>0.05)；TCE致敏组肾组织中ICAM-1的沉积量显著增多(P<0.05)；而与TCE致敏组相比，TCE+CatLi致敏组肾组织中ICAM-1的蛋白沉积量明显减少(P<0.05)。 8.各组小鼠肾组织中NF-κBp65和p38MAPK信号通路蛋白表达水平 Westernblot法检测各组小鼠肾组织中NF-κBp65和p38MAPK信号通路蛋白的表达水平。结果显示，p38和p65的蛋白表达量在所有处理组之间均无显著差异(P>0.05)。其磷酸化蛋白P-p38和P-p65的蛋白表达在空白对照组和溶剂对照组间也无显著差异(P>0.05)；而P-p38和P-p65在TCE致敏组肾组织中表达显著升高(P<0.05)；经CatLi预处理后，TCE+CatLi致敏组肾组织中P-p65和P-p38的蛋白表达量与TCE致敏组相比明显下降(P<0.05)。结果表明，CatLi通过拮抗肾足细胞内补体的活化，显著下调了NF-κBp65和p38MAPK信号的表达，NF-κBp65和p38MAPK通路参与了足细胞内补体激活介导的TCE致免疫肾损伤的过程。结论 1.TCE致敏后其肾组织中补体C3和C3a表达显著升高，且主要沉积在足细胞，表明TCE致敏小鼠肾脏足细胞内的补体系统被活化； 2.TCE致敏后肾足细胞内补体的激活上调了肾组织中ET-1的mRNA和蛋白表达，肾脏的ET-1系统被活化； 3.上调的ET-1作为促炎因子，促进了TNF-α，IL-1β，ICAM-1等炎性细胞因子的释放，导致肾脏的炎性损伤； 4.p38MAPK和NF- 收起

关键词 : 三氯乙烯肾损伤补体激活内皮素B型受体

9. 卢立康唑醇质体的研制及局部药效学研究

[学位论文] 林碧雯中国人民解放军医学院 2014年博士导师: 李恒进共113页

摘要 : 研究背景: 卢立康唑是一种新型的咪唑类抗真菌新药。它通过抑制麦角固醇的生物合成,发挥抗真菌作用。因其具有优秀的抗菌活性,近年受到临床研究的广泛关注。另一方面,在药物传递系统中,醇质体作为一种新的药物载体,也越来越受到关注。醇质体是由... 展开研究背景: 卢立康唑是一种新型的咪唑类抗真菌新药。它通过抑制麦角固醇的生物合成,发挥抗真菌作用。因其具有优秀的抗菌活性,近年受到临床研究的广泛关注。另一方面,在药物传递系统中,醇质体作为一种新的药物载体,也越来越受到关注。醇质体是由脂质体中添加乙醇演变而来,特有的理化性质使其能更有效的携带药物通过角质层释放至皮肤各层。因此,新型药物卢立康唑的醇质体制剂可成为扩大皮肤科抗真菌药物经皮给药的理想选择。研究卢立康唑醇质体的处方配比及理化性质为本课题研究目的之一。同时进一步分析卢立康唑醇质体体外透皮效果及体外抗菌活性为本课题研究目的之二。目的: 1、卢立康唑优秀的抗菌活性和醇质体制剂透皮性好、载药量高等优点结合,使得本研究以制备卢立康唑醇质体为研究切入点,以期充分发挥卢立康唑的局部药理作用,为皮肤科临床抗菌药物的选择提供研发新思路。 2、本研究通过对醇质体制备工艺、评价方法的筛选,为今后其他醇质体制剂的研发提供实验室依据和思路选择。 3、为了科学、准确的评价卢立康唑醇质体局部药效机制,体外透皮效果采用 Franz扩散池检测,并进行体外抗菌活性MIC的测定,研究卢立康唑醇质体的透皮性能和抗菌能力,为该药的外用制剂临床研究提供科学的数据。 4、为评价卢立康唑醇质体制备的可行性,将从制备方法到检测手段进行有效数据评价,并考察最优处方醇质体的理化性质,为临床应用的大规模制备提供实验室依据。实验方法: 1、醇质体的制备:醇质体制备采用薄膜法与注入法的比较。 2、醇质体粒径分析:激光动态散射仪检测并分析醇质体粒径。 3、醇质体的包封率(EE%):未包封的部分采用超速离心法及透析法分离,后进行高效液相色谱法(HPLC)检测药物含量,并进行数据比较。 4、药物的HPLC检测:均在室温下进行,以乙腈-0.1%磷酸二氢胺为流动相,紫外分光光度计测量数据为检测波长,进行精密度及回收率等方法学的研究。 5、醇质体的形态学观察:采用透射电镜进行观察分析。 6、体外大鼠皮肤透皮实验:采用Franz扩散池进行离体大鼠皮肤透皮实验。 7、卢立康唑醇质体体外抗菌活性研究:微量液基稀释法。实验结果: 1、卢立康唑醇质体的制备研究中发现,薄膜分散法在药物包封率、粒径等方面优于文献中常应用的注入法;且评价工艺中超速离心法较透析法更简洁、快速。 2、本研究结果发现乙醇浓度和磷脂量对卢立康唑醇质体的包封率有正相关;而乙醇浓度与醇质体的粒径有负相关,醇质体的粒径随磷脂量增加而增大。采用粒径、包封率为指标进行选择最优化处方,发现醇质体制剂在卵磷脂为5%(w/v)、乙醇为45%(v/v)、超声时间8min处方配比下,粒径小、粒径分布均匀和包封率高,卢立康唑醇质体中药物包封率达到了70%。 3、卢立康唑醇质体及非醇质体制剂体外透皮实验比较,结果显示:透皮速率卢立康唑醇质体>软膏制剂>脂质体>水醇溶液,24小时透皮量醇质体优于其他剂型,48小时皮肤全层滞留量醇质体与软膏相当,优于脂质体及水醇溶液。 4、卢立康唑不同制剂的体外抑菌实验结果表示,卢立康唑醇质体的抑菌效果优于脂质体及水醇溶液,且对毛癣菌属较念珠菌属敏感程度更高。结论: 1、采用薄膜法技术制备的醇质体,具有包封率高、透皮率好的优点。 2、最优化处方显示,在卵磷脂为5%(w/v)、乙醇为45%(v/v)、超声时间8分钟的处方配比下,卢立康唑醇质体制剂粒径较小、包封率高。且具有刺激性小、稳定性好等特点。 3、醇质体较脂质体、水醇溶液及即将上市的软膏透皮性能好。 4、体外实验,卢立康唑醇质体的抗菌性能优于脂质体及水醇溶液。收起

关键词 : 醇质体卢立康唑经皮给药透皮吸收抗菌活性药理作用

10. 人系统性红斑狼疮生长激素和泌乳素及其受体的临床和实验研究

[学位论文] 李锋复旦大学 2001年博士导师: 冯树芳共109页

摘要 : 为了探讨PRL和GH及共受体在SLE发病中的意义,我们应用测定垂体功能的TRH兴奋试验、时间分辨免疫发光法、放射免疫试验、酶联免疫吸附试验、放射性受体配基结合试验、流式细胞术以及RT-PCR等免疫学和分子生物学手段研究了SLE患者血清GH和PLG水平和外周... 展开

关键词 : 红斑狼疮系统性泌乳素生长激素受体