摘要: 背景：在广东省孕前地中海贫血防控项目中,夫妇双方血液学筛查地贫阳性的患者用微阵列的方法进行地贫基因检测.回顾分析样本检测结果发现3例特殊类型地贫基因型HKαα/--SEA. 方法：血液学筛查地贫阳性指征的夫妇双方者,应用PCR结合膜杂交法进行地贫... 展开 背景：在广东省孕前地中海贫血防控项目中,夫妇双方血液学筛查地贫阳性的患者用微阵列的方法进行地贫基因检测.回顾分析样本检测结果发现3例特殊类型地贫基因型HKαα/--SEA. 方法：血液学筛查地贫阳性指征的夫妇双方者,应用PCR结合膜杂交法进行地贫基因分析,异常病例经测序进行验证. 结果：2000对参检夫妇双方血常规检测均为阳性(MCV＜80fL)的样本用凯普α-和β-地中海贫血基因检测试剂盒(PCR+膜杂交法)进行基因诊断.在已进行基因诊断的2000对夫妇中,发现三例样本的检测结果与试剂盒的结果判读不符.由于凯普α-和β-地中海贫血基因检测试剂盒(PCR+膜杂交法)中NP信号点是α2基因的部分片段,作为--SEA缺失型、-α4.2缺失型和-α3.7缺失型的正常对照.当出现2种缺失型时,正常对照NP信号点不出,也就是说如果基因型为--SEA/-α3.7的样本,其杂交检测结果应不出现α2基因的正常对照NP信号点,然而,这三例样本的杂交检测结果出现NP信号点、-SEA信号点和-α3.7信号点,与试剂盒的设计原理不相符.NP点检测的是α2基因，当检测到NP阳性和-α3.7阳性时，可能存在三种基因型:αα/αα3.7、α3.7/αααanti4.2和--SEA/αanti4.2α3.7。当检测到SEA点、-α3.7点及NP点均呈阳性反应，需加做anti4.2基因扩增，才能确认是否为--SEA/αanti4.2α3.7基因型。本研究参考已报道的文献，分别对α2基因、--SEA缺失、-α3.7缺失、αααanti4.2、αααanti3.7和α1基因的部分片段设计引物，对这三例样本进行PCR扩增，PCR产物电泳结果出现三条电泳条带，其大小与α-PCR试剂引物扩增片段中的NP(1800bp)、--SEA(1350bp)和-α3.7(2020bp)大小一致:同时也对三例样本进行αααanti3.7,αααanti4.2,αl基因的部分片段的PCR扩增，电泳结果均出现αααanti4.2的电泳条带，而基因型为--SEA/αα、-α3.7/αα,αα/αα的样本只出现α1基因的部分片段PCR扩增产物，--SEA/-α3.7的样本没有出现电泳条带。由此可见，这三例特殊样本具有α2基因、--SEA缺失、-α3.7缺失和αααanti4.2，不含有α1基因，与文献报道的HKαα/--SEA基因型一致。测序结果说明这三例样本均至少保留一个α2基因，同时发生--SEA缺失型和-α3.7缺失型，经测序比对证实其基因型均为HKαα/--SEA。缺失型α地贫的原因是因为α珠蛋白基因1条或2条由于同源性或非同源性重组而丢失。非平衡交叉连接会产生多种复杂的缺失基因型。其中HK(中国香港)αα异常基因型是一种极少见的的非平衡交叉连接，同时含有-α3.7缺失及αααanti4.2基因等位基因的交叉连接片段。本文目标患者基因型形成机制可能是，首先其祖代形成αααanti4.2基因，然后下一代两个α基因同源重组形成-α3.7，于是就形成失αααanti4.2α3.7基因型。当其与--SEA基因携带者结合，即可能产生了患者的基因型--SEA/αanti4.2α3.7. 结论：本研究检测出了一种少见的地贫基因型(HKαα/--SEA)，即HKαα和东南亚缺失混合杂合子，丰富了临床研究资料，同时证实通过PCR+膜杂交方法对地中海贫血的检测，其灵敏度和特异性是很好的。HKαα的基因组成成分有一个α2基因和一个由α2和αl部分片段组成的融合基因(即右缺失片段)。所以比较HKαα或-α3.7分别与--SEA合并出现时，前者HKαα/--SEA的临床地贫症状明显轻于HbH病(-α3.7/--SEA)。本研究中三例基因型为HKαα/--SEA的临床样本，其临床症状也表现为典型的轻型α-地中海贫血。因而在诊断时，要特别注意这两种不同情况的鉴别，尤其是产前诊断时对于遗传咨询具有非常重要的意义。 收起