摘要: 目的：构建并鉴定靶向鹅源副粘病毒NA-1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体，以便进一步研究抗病转基因鹅的培育。方法：针对GPMV NP、M基因mRNA保守区序列，分别设计并合成3对Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后线性化的pLKD—GFP载... 展开 目的：构建并鉴定靶向鹅源副粘病毒NA-1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体，以便进一步研究抗病转基因鹅的培育。方法：针对GPMV NP、M基因mRNA保守区序列，分别设计并合成3对Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后线性化的pLKD—GFP载体，连接、转化，产生pLKD—shNP1、2、3;pLKD—shM1、2、3慢病毒干扰载体，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。用pLKD—shNP、pLKD—shM分别与辅助质粒pCMV-dR8.2和pCMV-VSV-G共转染包装细胞293T细胞，包装产生重组慢病毒假病毒颗粒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实，成功构建了慢病毒载体pLKD—shNP、pLKD—shM。包装慢病毒悬液滴度为：5×107TU／ml。结论:成功构建鹅源副粘病毒NA—1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体，为应用慢病毒介导RNAi技术培育抗病转基因鹅奠定一定基础。 收起