摘要: 目的:探讨 LncRNANEAT1 和 miR-124 对 PC12 细胞 Wnt/β-catenin 信号通路及神经突生长的作用机制。 方法:建立体外PC12细胞模型，将miR-124模拟物、miR-124模拟物对照、LncRNA NEAT1过表达载体、LncRNA NEAT1过表达空载体和NEAT1 siRNA分别转染到... 展开 目的:探讨 LncRNANEAT1 和 miR-124 对 PC12 细胞 Wnt/β-catenin 信号通路及神经突生长的作用机制。 方法:建立体外PC12细胞模型，将miR-124模拟物、miR-124模拟物对照、LncRNA NEAT1过表达载体、LncRNA NEAT1过表达空载体和NEAT1 siRNA分别转染到体外培养的PC12细胞中。待培养至第5天，运用Tuj1/DAPI免疫荧光染色PC12细胞神经突，荧光显微镜下拍摄并进行神经突长度的测量。运用实时荧光定量PCR检测LncRNA NEAT1和Wnt信号通路相关基因(β-catenin、Wnt3a、Wnt5a和Wisp1)的表达量，并采用蛋白质免疫印迹试验测定PC12细胞内β-catenin的累积水平。此外，运用β-catenin/DAPI免疫荧光染色PC12细胞，观察其质/核β-catenin分布情况。 结果:在体外PC12细胞模型中表明LncRNA NEAT1和miR-124均能促进PC12细胞神经突生长。与对照组(137.3±36.3μm/cell)相比，miR-124模拟物组 PC12 细胞神经突生长长度增长 25.8％(172.8±38.1μm/cell,P＜0.001);LncRNANEAT1过表达组PC12细胞神经突长度(166.1±54.2μm/cell)比其对照组(128.2±26.2μm/cell)增长 29.6％(P＜0.001),比 NEAT1 siRNA 组(125±40.9μm/cell)增长 32.9％(P＜0.001),而对照组与 NEAT1 siRNA 组其差异无统计学意义(P=0.963)。LncRNA Neat1过表达时Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt3a、Wnt5a和下游靶基因Wisp1表达上升，并提高β-catenin在细胞内累积水平和β-catenin核/质平均荧光强度比值，促进β-catenin核转移从而激活Wnt信号通路。然而miR-124过表达时Wnt配体及β-catenin基因表达下降，导致β-catenin表达水平降低且稳定性下降，Wnt下游靶基因Wisp1表达水平和β-catenin核/质平均荧光强度比值则无明显变化。此外，研究还证实miR-124表达增加导致PC12细胞LncRNA NEAT1表达量下降。 结论:LncRNA NEAT1可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进PC 12细胞神经突生长;miR-124可促进PC12细胞神经突生长，但miR-124过表达并未促使Wnt/β-catenin信号通路受抑制或被激活。 收起