摘要: 鸡胚生长发育过程中，尿囊膜和绒毛膜中胚层逐渐汇合，形成绒毛尿囊膜（chickembryochorioallantoicmembrane，CAM），CAM上布满丰富的血管网络。鸡胚绒毛尿囊膜血管实验模型是研究血管新生和抗血管新生的常用动物模型之一，因为模型构建简单、周期短... 展开 鸡胚生长发育过程中，尿囊膜和绒毛膜中胚层逐渐汇合，形成绒毛尿囊膜（chickembryochorioallantoicmembrane，CAM），CAM上布满丰富的血管网络。鸡胚绒毛尿囊膜血管实验模型是研究血管新生和抗血管新生的常用动物模型之一，因为模型构建简单、周期短、成本低廉、适合大规模药物筛选从而得到广泛应用。鸡胚绒毛尿囊膜血管实验模型的构建主要包括种蛋孵化、尿囊膜暴露、给药三个步骤部分，已报道的模型构建方法各异，本文首次对鸡胚尿囊膜血管实验模型构建方法做了综合对比研究。合适的模型构建方法有助于提高鸡胚成活率，便于大规模药物筛选，因此本文首先对鸡胚发育过程进行了观察，根据观察结果，对鸡胚绒毛尿囊膜血管实验模型构建过程中涉及到的种蛋品种、鸡胚孵育方法、CAM暴露方式、孵育时间、给药载体做了实验对比，并且创新性的采用了无载体膜上给药，利用该给药方式构建了一种鸡胚成活率高、实验操作简单、便于给药与结果统计的鸡胚绒毛尿囊膜血管实验模型，并用康柏西普和VEGF对该模型进行了验证。 实验结果显示鸡胚孵化成活率与种蛋品种、孵育方法、尿囊膜暴露方法、尿囊膜初始暴露时间有关。种蛋质量检验结果显示SPF种蛋、九斤红种蛋、本地土鸡种蛋合格率依次为100%、75%、80%，孵化率依次为95%、70%、50%。暴露CAM后继续孵化，三个品种的鸡胚成活率依次为78.9%、57.1%、30%。随着鸡胚孵化，各品种的鸡胚尿囊膜血管面积百分比都逐渐变大，但是SPF鸡胚尿囊膜血管面积百分比（26.5%±1.5）远高于九斤红（20.0%±4.7）及土鸡鸡胚（16.6%±5.0）。相对于九斤红种蛋和本地土鸡蛋，SPF种蛋具有质量均一、重复率高、血管丰富、鸡胚孵化率高、成活率高的优点。 在考虑鸡胚最高成活率的情况下，带壳培养优于无壳培养，气室开孔法暴露CAM优于构造假气室。带壳培养的本地土鸡鸡胚暴露CAM后成活率为20%，无壳培养的鸡胚有80%在转移至培养皿24小时后死亡，剩余20%在转移至培养皿48小时后死亡。构造假气室法暴露CAM的操作失败率是30.1%，气室开孔法暴露CAM的操作失败率是7.7%。CAM暴露后继续孵化，构造假气室法暴露CAM的鸡胚成活率为12.5%，采用气室开孔法暴露CAM的鸡胚成活率为37.5%。CAM暴露的最佳时间是鸡胚孵化第7-8天。 传统的给药载体一般为硅胶圈、明胶海绵或者滤纸，本次实验采用的无载体给药作为一种创新的给药方式可以代替传统给药载体，并且无载体给药具有药物体积不受限制、药物不会被载体吸收能够直接全部作用于鸡胚、不影响CAM血管生长的优点，同时由于血管不被给药载体遮挡也便于结果观察和统计。 采用康柏西普和VEGF对构建的鸡胚尿囊膜血管实验模型进行验证，结果显示VEGF具有明显的促进血管分支、增粗作用，康博西普眼用注射液具有血管生长抑制作用。给药后72小时，生理盐水组与VEGF给药组、康柏西普给药组血管面积百分比相比，差异均具有显著的临床统计学研究意义（P＜0.01）；生理盐水组与VEGF康柏西普联合给药组比较不具有统计学意义；VEGF给药组与康柏西普给药组、VEGF-康柏西普联合给药组比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。 收起