摘要: 本文主要从以下几个部分展开论述： 第一部分 评估OH2对VX2肿瘤的感染效力及最佳滴度的筛选 目的：初步探究溶瘤病毒OH2对VX2肿瘤的感染效力，并筛选出最佳治疗滴度。 方法：采用兔VX2皮下瘤模型并分为3组，分别注射滴度为1×107、1×106 CCID... 展开 本文主要从以下几个部分展开论述： 第一部分 评估OH2对VX2肿瘤的感染效力及最佳滴度的筛选 目的：初步探究溶瘤病毒OH2对VX2肿瘤的感染效力，并筛选出最佳治疗滴度。 方法：采用兔VX2皮下瘤模型并分为3组，分别注射滴度为1×107、1×106 CCID50和1×105 CCID50的带荧光素酶基因的溶瘤病毒OH2-Luc，于不同时间点进行活体荧光成像和测量皮下瘤大小。 结果：OH2-Luc瘤内注射后，1×107 CCID50组荧光表达强度显著高于其他两组（Plt;0.001），第一组OH2-Luc的肿瘤抑制效果显著优于第二组和第三组（P=0.005）。 结论：OH2能有效感染VX2肿瘤组织，1×107 CCID50剂量组的抗肿瘤效果也显著优于中、低剂量组。因此本实验三组中1×107 CCID50为OH2的最佳治疗剂量。 第二部分 OH2治疗肝癌的最佳给药方式 目的：筛选出OH2的最佳给药模式，并探究其机制。 方法：兔VX2肝癌移植瘤模型并分为以下4组：第一组进行经导管肝动脉灌注溶瘤病毒OH2后，联合明胶海绵颗粒栓塞（transarterial viroembolization, TAVE）；第二组进行单纯经导管肝动脉灌注OH2（transarterial viroinfusion, TAVI）；第三组开腹对肝癌进行OH2瘤内注射（ intratumor injection, TI ）；第四组进行经兔耳缘静脉注射OH2 （intravenous injection, IV）。在术后7天将肿瘤标本进行病理HE染色、TUNEL、Ki-67、Masson和OH2的免疫组化染色，对肿瘤组织和正常器官组织内OH2的表达量进行qPCR定量检测，并观察实验兔的生存时间。 结果：TAVE组的肿瘤坏死率和中位生存时间显著高于其他三组，OH2经动脉途径给药后会分布得更加均匀、阳性染色更多，Masson染色结果显示在TI组肿瘤组织内纤维成份阻挡OH2感染并杀伤邻近肿瘤细胞的表现较为明显。OH2的qPCR检测结果显示在TAVE组中OH2的复制更加集中于肿瘤组织。 结论：与其他3种给药途径相比，TAVE为最佳给药方式。 第三部分 TAVE介入治疗肝癌的疗效评估和机制探究 目的：比较TAVE与其他介入治疗方式治疗肝癌的疗效，并探究TAVE的作用机制。 方法：采用兔VX2肝左叶单个肝癌模型、肝左叶及肝右叶VX2肝癌模型和VX2皮下瘤这三种模型中的一种或多种联合使用，并依据各部分的研究内容采用不同的干预方式，主要为TAVE、TAVI、经动脉栓塞治疗（transarterial embolization, TAE）和生理盐水（normal saline, NS）对照组。通过对不同实验组的标本进行HE染色评估肿瘤坏死，并进行多种免疫组化及免疫荧光染色评估肿瘤微环境的变化。 结果：TAVE组的肿瘤坏死率和中位生存时间显著高于其他三组（Plt;0.001），OH2灌注和栓塞这两种独立治疗方式叠加后的肿瘤坏死率均显著低于TAVE组（Plt;0.05）。先行不完全栓塞再灌注OH2治疗也显著提高了肿瘤坏死率（Plt;0.001）。此外，对肝左叶肿瘤干预后，4组中仅TAVE组的肝右叶肿瘤受到了显著抑制（Plt;0.001）。再挑战实验中，与对照组相比，TAVE组皮下瘤的生长也显著受到了抑制（P=0.039）。与TAE组相比，TAVE组中缺氧诱导因子-1α蛋白的表达无明显减少，但血管内皮生长因子却极少表达。CD8+T细胞、CD11c+DC细胞在TAVE组显著高于TAE组和NS组（Plt;0.001）Foxp3+Treg和Gr-1+MDSCs在TAVE组和TAVI组显著低于TAE组和NS组（Plt;0.05），IFN-γ的表达量在TAVE组也显著高于其他三组（Plt;0.05）。 结论：TAVE治疗不仅能取得出色的局部疗效和生存获益，而且还实现了一定的旁观者效应和免疫记忆效应。这些疗效的取得，与TAVE这种联合治疗方式的协同作用密切相关。 收起