摘要: 根据本实验室前期工作中获得的东北林蛙皮肤抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ序列，优化后利用真核表达体系毕赤酵母进行对目的抗菌肽进行诱导、表达及纯化。对表达后的重组抗菌肽进行抑菌实验，评价其抗菌活性以及协同作用。 本实验将Dybowski... 展开 根据本实验室前期工作中获得的东北林蛙皮肤抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ序列，优化后利用真核表达体系毕赤酵母进行对目的抗菌肽进行诱导、表达及纯化。对表达后的重组抗菌肽进行抑菌实验，评价其抗菌活性以及协同作用。 本实验将Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ进行全基因合成后，对其进行双酶切，获得目的基因，将目的基因连接到Ppic9K质粒上，获得pPic9K-Dybowskin-YJ及pPic9K-Ranatuerin-2YJ重组质粒。将重组质粒pPic9K-Dybowskin-YJ及Ppic9K-Ranatuerin-2YJ电转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中，通过平板培养以及PCR筛选出阳性且高表达的重组菌株。利用甲醇对重组的菌株进行诱导，对表达的上清液进行Tricine-SDS-PAGE电泳检测，检测目的蛋白是否表达。再利用Ni-Agarose分离及纯化目的抗菌肽，利用Tricine-SDS-PAGE电泳检测观察其纯化效果。重组Dybowskin-YJ和重组Ranatuerin-2YJ对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的MIC皆为50ug/mL。重组抗菌肽Dybowskin-YJ和Ranatuerin-2YJ在抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌时均具有协同作用。 本实验建立了抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ的毕赤酵母表达系统，诱导表达纯化了重组抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ，且对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌活性具有明显的抑菌活性。为重组抗菌肽Dybowskin-YJ和Ranatuerin-2YJ的实际应用提供数据基础。 收起