摘要: 本文以卵胎生许氏平鲉(Sebastesschlegelii)为实验对象，利用组织切片技术观察性腺发育和分化情况，统计雌雄比例；利用酶联免疫法和I125标记法测定E2和T含量；利用qRT-PCR对其性腺分化相关基因进行表达分析，从而探讨自然条件下、温度调控和光周期处... 展开 本文以卵胎生许氏平鲉(Sebastesschlegelii)为实验对象，利用组织切片技术观察性腺发育和分化情况，统计雌雄比例；利用酶联免疫法和I125标记法测定E2和T含量；利用qRT-PCR对其性腺分化相关基因进行表达分析，从而探讨自然条件下、温度调控和光周期处理对许氏平鲉性腺分化的影响及其潜在机制。研究结果如下： 1.许氏平鲉性腺分化及其机制 在自然条件下，35dpb时一部分性腺中出现裂隙，将来可能发育为卵巢腔，标志着卵巢分化的开始，另一部分性腺无裂隙出现，将来可能发育为精巢；68dpb时发现输精管的出现，精巢开始分化；发育至80dpb时精巢和卵巢仍未出现细胞学上的分化。 在1dpb时，全鱼组织匀浆中E2和T的含量最高，之后逐渐降低并趋于稳定，在性腺分化前期E2和T处于较高水平，性腺分化期间下降至极低水平。 在45-50dpb时ERα的表达水平显著上升，50dpb时ERβ2表达量显著上升，说明ERα和ERβ2的表达可能与卵巢腔的形成有关；foxl2和cyp19a1a的表达量波动趋势基本一致，说明foxl2与cyp19a1a的表达相关，并在卵巢分化中起作用；sox3、sox9和dmrt1的表达水平一直处于较低水平，可能与精巢的后分化有关。amh在30-50dpb的表达量波动情况与sox9在25-45dpb基本一致，说明amh的表达可能是受到sox9的调节。 2.温度对许氏平鲉性腺分化的影响及其机制 在24℃下，25dpb时性腺开始分化，比自然条件下提前了5天左右，在40dpb时，卵巢和精巢的发育程度为高温组(24℃)＞对照组(20℃)＞低温组(16℃)，24℃、20℃和16℃的雌性率分别为70.0%、42.9%和33.3%，表明高温促进性腺发育，偏雌性化，反之延缓性腺发育，偏雄性化。 在温度处理下，24℃和20℃下，E2在较高水平持续时间较长，性腺偏雌性发育，16℃的E2水平迅速下降，可能是由于低温抑制了芳香化酶的活性，性腺偏雄性发育。24℃和20℃下，T水平从30-35dpb急剧降低，在16℃下，35dpb时仍处于较高水平，说明在性腺分化时期，温度较高时，E2水平较高，T水平较低，性腺偏雌性发育；反之，性腺偏雄性发育。 在24℃下，40dpb时cyp19a1a的表达水平显著上调，可能与高温导致性腺分化偏雌性发育有关；ERβ2在16℃下表达水平显著降低，说明ERβ2的表达被抑制可能与性腺偏雄性发育有一定的关系；24℃和20℃下，foxl2在25-35dpb处于较高水平，之后下降，而低温组在30dpb时表达水平开始上升，说明foxl2在性腺分化早期的高表达水平可能与卵巢分化有关；在30-50dpb，sox3、sox9和dmrt1的表达水平变化总趋势基本一致，说明三者之间的表达有一定的联系，sox9和dmrt1在低温组中的表达水平基本下调，可能与高温加快精巢分化速度，低温延缓精巢分化速度有关。 3.光周期对许氏平鲉性腺分化的影响及其机制 光周期实验开始时性腺已开始分化，21d时，对照组(L:D=12:12)的卵巢发育速度最快，短光照(L:D=8:16)最慢，对照组和短光照组精巢的发育速度快于长光照组，短光照组和长光照组(L:D=16:8)雌性率均为50%左右，对照组为66.7%，说明光周期为L:D=12:12时，性腺分化偏雌性发育，此时卵巢和精巢发育均较快。 在光周期处理下，12d时对照组的E2和T含量下降到较低水平，长光照组在12d和15d下降到较低水平，短光照组在18d时才下降到较低水平，进一步了说明光周期为L:D=12:12时更有利于许氏平鲉的性腺分化。 在第1d时，ERβ2,foxl2和cyp19a1a的表达水平的总趋势基本一致，开始时均处于较高水平，随着卵巢发育，逐渐降低且稳定在较低水平，说明这三个基因之间可能有一定的联系，并与卵巢分化有关。ERα在短光照下，除了第1d处于较高水平，之后一直处于较低水平，长光照下ERα的表达水平基本较高，说明短光照可能抑制了ERα的表达，反之促进ERα的表达，但在性腺分化中起的作用并不大。sox3、sox9和dmrt1的表达水平变化总趋势基本一致，说明三者之间的表达有一定的联系，在实验的后期sox3、sox9、dmrt1和amh的表达水平逐渐升高，可能与精巢的后分化有关。短光照下sox9和dmrt1的表达水平显著上升可能与精巢分化有关，说明短光照有利于精巢的分化。 收起