摘要: 【目的】 原代培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)，探讨低浓度去乙酰化酶抑制剂Tubacin长期表观遗传修饰的BMSCs对大鼠肺纤维化的作用。 【方法】 1.采用全骨髓贴壁法体外提取并培养大鼠BMSCs，部分细胞从原代开始用0.5μMTubacin长期预处理... 展开 【目的】 原代培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)，探讨低浓度去乙酰化酶抑制剂Tubacin长期表观遗传修饰的BMSCs对大鼠肺纤维化的作用。 【方法】 1.采用全骨髓贴壁法体外提取并培养大鼠BMSCs，部分细胞从原代开始用0.5μMTubacin长期预处理，取第3-4代大鼠细胞用于实验。 2.大鼠随机分对照（Control）组、博来霉素（BLM）组、骨髓间充质干细胞（BMSCs）组和Tubacin预处理组（Tub-BMSCs）组四组，气管内注射博来霉素（BLM）5mg/kg诱导肺纤维化模型。造模后第3天BMSCs组和Tub-BMSCs组尾静脉注射4×106个干细胞进行治疗。 3.观察各组大鼠的一般情况，记录大鼠体重变化。 4.在不同时间点取大鼠肺组织，观察大体改变。 5.肺泡组织切片HE染色和Masson染色观察组织修复效果。 6.小动物成像仪对大鼠体内不同时间点荧光染色的BMSCs和Tub-BMSCs进行示踪，观察细胞在动物体内的存活情况。 7.蛋白印迹法检测各组肺组织中COL1、α-SMA和Peroxiredoxin-2蛋白表达水平变化。 【结果】 1.肺组织大体标本显示：造模第14天与Control组相比，BLM组肺组织水肿，表面粗糙，有大量白色片状物出现在肺门远端；BMSCs和Tub-BMSCs组肺组织仅有少量白色点状物稀疏分布。造模第7天与Control组相比，BLM组大鼠体重显著下降（Plt;0.01），第14天BLM组大鼠体重继续下降（Plt;0.05）；而与BMSCs和Tub-BMSCs组比较体重减少无明显差异。 2.HE染色可见：造模第7天Control组肺泡壁结构完整，BLM组肺泡壁破坏，有炎症细胞和血细胞渗出；BMSCs和Tub-BMSCs组肺泡壁不连续，有少量炎症细胞渗出。造模第14天Control组肺泡壁保持正常结构，BLM组肺泡壁严重破坏，结构紊乱，肺泡间隔增宽，可见少量纤维病灶，以终末支气管居多。BMSCs和Tub-BMSCs组较BLM组病变轻。第14天Masson染色结果：BLM组于肺泡间隔处可见蓝色胶原纤维，BMSCs和Tub-BMSCs组蓝色胶原纤维和红色肌纤维较少。 3.小动物成像仪结果显示：尾静脉注射Dir处理的细胞后，BMSCs和Tub-BMSCs组迅速出现荧光，表明细胞归巢到肺部；第14天时荧光仍可见，但亮度减弱，说明移植细胞在肺内可较长时间存活，随时间推移逐渐减少。 4.蛋白免疫印记实验显示：与Control组14天相比，BLM组的Ⅰ型胶原蛋白表达显著增加（P＜0.01）；与BLM组相比，BMSCs组和Tub-BMSCs组的α-SMA蛋白表达相应下调(Plt;0.05)，而Prx-2蛋白表达相应上调（Plt;0.05）。 【结论】 1.HDAC6的特异性抑制剂tubacin长期预处理BMSCs可归巢并较长时间存活在于大鼠肺组织中。 2.低浓度Tubacin处理的BMSCs，可下调α-SMA蛋白表达水平，上调Peroxiredoxin-2，降低氧化应激反应，减少炎症反应，抑制肺纤维化的形成。 收起