摘要: 病毒双链DNA(double-strand DNA，dsDNA)是一类经典的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern，PAMP)，能够被细胞质中的环状鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase，cGAS)识别。cGAS结合病毒dsDNA后发生寡聚化，并利用GTP和... 展开 病毒双链DNA(double-strand DNA，dsDNA)是一类经典的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern，PAMP)，能够被细胞质中的环状鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase，cGAS)识别。cGAS结合病毒dsDNA后发生寡聚化，并利用GTP和ATP合成第二信使环二单磷酸鸟苷-腺苷(cGAMP)。cGAMP与定位在内质网的接头蛋白MITA(又称为STING，MPYS，ERIS，TMEM173)结合，诱导MITA的激活。MITA激活后发生从内质网经过内质网-高尔基中间体向核周点状结构的转运。在迁移过程中，MITA招募蛋白激酶TBK1，促进TBK1发生自身磷酸化并对MITAS366位点进行磷酸化修饰。MITAS366位点的磷酸化对MITA招募转录因子IRF3至关重要。复合物MITA-TBK1-IRF3组装完成后，IRF3被TBK1磷酸化，形成二聚体并迁移入核，启动下游基因的转录。 DNA病毒诱导天然免疫应答信号转导过程的调控机制尚未得到充分阐释。为了进一步探明cGAS-MITA通路的调控机制，我们对蛋白激酶进行了表达克隆筛选，发现过量表达CSK促进cGAS-MITA诱导的IFN-β启动子激活。利用CRISPER/Cas9技术对细胞进行基因编辑，我们发现CSK蛋白缺失抑制HSV-1、dsDNA和cGAMP诱导的下游基因转录，以及HSV-1诱导的MITA、IRF3磷酸化。生化实验显示，内源性CSK与MITA发生组成性相互作用，并依赖蛋白激酶活性对MITA进行Y240、Y245位点的磷酸化修饰。Y240、Y245位点的磷酸化对于MITA的激活至关重要。 最近的报道表明，MITA的酪氨酸磷酸化对增强其蛋白稳定性以及结合cGAMP发生活化具有重要意义。MITAY240位点的磷酸化修饰能提高其与cGAMP的结合能力。酪氨酸激酶SRC通过磷酸化MITAY245位点维持其稳定性。磷酸酶PTPN1/2能够去除MITAY245位点的磷酸化修饰，促进MITA通过不依赖于泛素的20S蛋白酶体途径降解，从而抑制抗DNA病毒天然免疫反应。由以上报道结合本研究结果表明，CSK通过靶向MITAY240、Y245位点的磷酸化修饰在抗DNA病毒天然免疫应答中发挥重要调控功能。我们的发现有助于了解cGAS-MITA介导抗DNA病毒天然免疫应答的精细调控机制。 收起