摘要: 在临床上瘙痒是妊娠期女性常见的主诉之一，大多分娩后立即消失。催产素是(oxytocin，OXT)主要由下丘脑室旁核(paraventricular nucleus, PVN)和视上核(supraoptic nucleus, SON)合成的一种激素，在妊娠中后期分泌大量增加，主要参与生产和泌乳等与分... 展开 在临床上瘙痒是妊娠期女性常见的主诉之一，大多分娩后立即消失。催产素是(oxytocin，OXT)主要由下丘脑室旁核(paraventricular nucleus, PVN)和视上核(supraoptic nucleus, SON)合成的一种激素，在妊娠中后期分泌大量增加，主要参与生产和泌乳等与分娩相关功能的调节，并参与了认知、社会行为、成瘾、痛觉等的调节。有报道指出，中枢或者外周给予OXT均可以引起动物的搔抓行为，但OXT到底如何诱发或易化瘙痒？妊娠期体内OXT的增多与部分孕妇出现痒敏感性增加是否有关？这些问题都亟待阐明。鉴于中枢机制的复杂性，本研究主要以OXT诱发或易化瘙痒的外周机制研究为主。力争阐明催产素受体(oxytocin receptor，OXTR)和精氨酸加压素受体1A(arginine vasopressin receptor 1A，AVPR1A)这两种以OXT为配体的受体在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)以及皮肤参与痒觉信息调控的机制。 另外，孕晚期小鼠体内的雌激素水平也显著升高，它是否也与孕期瘙痒有关呢？同时，临床上观察到痒觉感受也存在性别差异，以往的报道以及我们的研究也观察到雌雄鼠的痒觉敏感性确实存在差异。雌激素作为性别差异的关键激素，是否也决定着痒觉的性别差异，是否也参与痒觉信息的调控，相关机制如何，值得探讨。 围绕上述问题，我们以正常C57小鼠和孕鼠作为研究对象，制备急性痒模型，综合运用行为药理学、免疫荧光组织化学染色、荧光原位杂交、甲苯胺蓝染色、酶联免疫吸附试验等多种形态学、行为学以及分子生物学方法，对上述问题展开研究。研究分为以下三个部分： 1、催产素可能是孕期瘙痒的主要诱因 目的： 确认孕晚期小鼠体内OXT含量的增加是导致孕期瘙痒的主要因素，并观察正常小鼠外源性给予OXT能否诱发或增加其痒觉敏感性。 方法： (1)分别检测不同孕期和产后不同时期小鼠颈背部皮内注射组胺所诱发的搔抓行为的变化。 (2)对比检测正常对照小鼠和孕晚期小鼠颈背部皮内注射组胺和氯喹所诱发的搔抓行为的不同。 (3)使用免疫荧光组织化学染色方法观察小鼠孕晚期及产后1天PVN中OXT阳性神经元数量的变化。 (4)使用酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测小鼠孕晚期及产后5天血清中OXT含量的变化。 (5)使用行为药理学方法观察皮内注射不同浓度OXT后小鼠的搔抓行为。 (6)使用行为药理学方法观察低浓度OXT对致痒剂所致小鼠搔抓行为是否有促进作用。 结果： (1)相对于孕早期(孕5天)和孕中期(孕10天)小鼠，孕晚期(孕15天后)小鼠对组胺的痒敏感性明显增加，且产后1天便基本恢复正常。 (2)相对于正常雄鼠和雌鼠，孕晚期小鼠皮内注射组胺和氯喹所引起的搔抓次数均明显增多。 (3)相比于正常雌鼠，孕晚期小鼠PVN中OXT阳性神经元的数量显著增多，且产后1天便开始大幅下降至正常水平。 (4)孕晚期小鼠血清中OXT的含量显著高于正常雄鼠以及雌鼠，并且产后第5天已经下降至正常水平。 (5)皮内注射低浓度的OXT(0.2 nmol)不能引起小鼠的搔抓行为，但注射高浓度的OXT(5nmol和10nmol)可以诱发小鼠的瘙抓行为，且呈剂量依赖关系。 (6)低浓度的OXT(0.2 nmol)可明显增加正常雄鼠或者雌鼠对组胺的痒敏感性。 小结： 相比于正常小鼠，孕晚期小鼠皮内注射组胺和氯喹所诱发的搔抓行为均明显增加，且产后便迅速开始恢复正常；孕晚期小鼠痒觉敏感性的增高与PVN以及血清中OXT含量的增高相对应；正常小鼠皮内注射高浓度的OXT可以直接诱发瘙痒，低浓度的OXT虽不能直接诱发瘙痒，但可以易化组胺所引起的痒。因此，无论内源性还是外源性的OXT增加，均可增加机体对痒觉的敏感性，甚至直接诱发瘙痒；孕期瘙痒确实与体内OXT含量的增多密切相关。 2、催产素易化或诱发瘙痒的外周机制 目的： 第一部分实验证实了OXT在孕鼠体内含量的增加与孕期瘙痒密切相关，并且外源性给予高浓度和低浓度的OXT可以分别诱发瘙痒或易化痒觉敏感性。在此基础上，我们将进一步在皮肤和DRG分析OXT易化或诱发瘙痒的外周机制，并通过腹腔内注射雌激素受体拮抗剂观察孕鼠体内增高的雌激素是否与孕期瘙痒有关。 方法： (1)使用行为药理学方法观察正常雄鼠、雌鼠以及孕鼠皮内注射OXTR或AVPR1A拮抗剂对组胺所引起搔抓行为的影响。 (2)使用行为药理学方法，对正常雄鼠和雌鼠皮内注射低浓度OXT易化瘙痒后再给予OXTR或AVPR1A拮抗剂，观察其对OXT易化组胺痒的影响。 (3)使用行为药理学方法观察正常雌鼠和孕晚期小鼠腹腔给予非特异性雌激素受体拮抗剂ICI182780后，各组小鼠对组胺所引起痒的敏感性变化。 (4)使用形态学方法观察DRG中OXTR与降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)、瞬时感受器电位阳离子通道V1(transient receptor potential cation channel V1,TRPV1)以及P物质(substance P,SP)等的共表达情况。 (5)观察TRPV1基因敲除小鼠的OXT促痒效应是否发生改变。 (6)使用甲苯胺蓝染色法观察正常雌鼠、孕鼠以及皮内注射生理盐水(normal saline, NS)和高浓度OXT小鼠皮肤组织中肥大细胞脱颗粒情况。 结果： (1)正常雄鼠和雌鼠皮内注射OXTR或AVPR1A拮抗剂均不会影响组胺注射所引起的搔抓行为；而孕晚期小鼠皮内注射OXTR或AVPR1A拮抗剂均可反转其痒觉敏感性增加的现象。 (2)正常雄鼠和雌鼠皮内注射低浓度OXT增加其痒觉敏感性后，再注射OXTR或AVPR1A拮抗剂均可反转痒觉敏感性增高的现象。 (3)正常雌鼠和孕晚期小鼠腹腔注射非选择性雌激素受体拮抗剂后，两组小鼠对组胺的搔抓反应均明显降低，但孕鼠的搔抓次数仍然相对较高，说明OXT，而非雌激素，是孕期痒敏感性增高的主要原因。 (4)在小鼠DRG中，OXTR阳性神经元高表达TRPV1，与SP不共表达。 (5)TRPV1基因敲除小鼠皮内注射低浓度OXT的促痒作用减弱。 (6)孕鼠真皮层中的肥大细胞不会自发脱颗粒，而皮下注射高浓度OXT可以诱肥大细胞脱颗粒并释放组胺，从而引起瘙痒。 小结： 孕晚期由于OXT升高所引起的痒觉敏感性增加，以及皮内注射低浓度OXT的促痒效应均由位于外周的OXTR和AVPR1A共同介导；OXT的部分促痒效应可能是通过OXTR与TRPV1的协同效应发挥的。高浓度的OXT可使正常小鼠皮肤肥大细胞脱颗粒从而导致瘙痒。 3、雌激素易化瘙痒的外周机制 目的： 前两部分实验中，我们观察到：雌鼠的痒觉敏感性高于雄鼠，且非特异性雌激素受体拮抗剂可以降低雌鼠的痒觉敏感性。另外，临床上也观察到女性的痒觉敏感性普遍高于男性。本部分实验进一步明确雌激素是造成痒觉性别差异的关键因素，并探究其易化瘙痒的外周机制。 方法： (1)使用行为药理学方法观察正常雄鼠和雌鼠皮内注射组胺所引起搔抓次数(痒觉敏感性)的差异，以及正常雄鼠腹部皮下注射雌激素对其痒觉敏感性的影响。 (2)使用行为药理学方法观察去卵巢以及去卵巢后再补充雌激素对雌性小鼠痒觉敏感性的影响。 (3)使用行为药理学方法对比腹腔注射雌激素受体α(ER-α)拮抗剂MPP、雌激素受体β(ER-β)拮抗剂PHTPP或G蛋白偶联受体30(GPR30)拮抗剂G15对雌鼠痒觉敏感性的影响。 结果： (1)雌鼠的痒觉敏感性明显高于雄鼠，且雄鼠外源性注射雌激素后，其痒觉敏感性明显增强。 (2)雌鼠去卵巢后，其对组胺的痒觉敏感性显著降低，外源性补充雌激素可以恢复其痒觉敏感性。 (3)腹腔注射ER-α拮抗剂MPP可以降低雌鼠对组胺的敏感性，而ER-β拮抗剂和GPR30拮抗剂则无明显影响。 小结： 雌激素水平的差异可能是痒觉感受性别差异的主要原因；雌激素含量的增加可以增加小鼠的痒觉敏感性，且主要由ERα介导。 结论：体内OXT含量的增加是引起孕期瘙痒的关键因素；在外周，OXT的促痒效应由OXTR和AVPR1A共同介导，并且OXTR通过与TRPV1的协同效应介导了部分OXT的促痒效应；体内雌激素含量的不同可能是痒觉感受性别差异的关键因素，但孕期雌激素含量的增加并非妊娠期瘙痒的主要原因；在外周，雌激素的促痒效应可能是通过ER-α介导的。 收起