摘要: 人染色体22q11.2区域缺失引起一系列发育障碍，其中约有23%~43%的病人患有精神分裂症（SCZ）。SCZ易感基因DGCR2（DiGeorgesyndromecriticalregiongene2）位于缺失区域，在SCZ病人脑中表达降低。最近有研究对SCZ病人外显子测序表明DGCR2基因上一新生（... 展开 人染色体22q11.2区域缺失引起一系列发育障碍，其中约有23%~43%的病人患有精神分裂症（SCZ）。SCZ易感基因DGCR2（DiGeorgesyndromecriticalregiongene2）位于缺失区域，在SCZ病人脑中表达降低。最近有研究对SCZ病人外显子测序表明DGCR2基因上一新生（denovo）错义突变（P429R）与SCZ相关，但P429R突变对DGCR2功能的影响以及与SCZ之间的关系并不清楚。为此，我们利用聚合酶链式反应（PCR）定点突变的方法构建了DGCR2-P429R突变体的真核细胞表达载体。在细胞系中过表达P429R突变体，通过免疫印迹（Immunoblotting,IB）发现其水平与野生型（WT）的DGCR2相当；但P429R在蛋白质电泳中的迁移速率变快，其相对分子量比WT小8kDa（kilo-Dalton）左右。进一步，在原代培养海马神经元中表达P429R突变体，通过免疫细胞化学（Immunocytochemistry，ICC）发现其在神经元的分布与WT一致。DGCR2是一种主要分布在突触后致密（PSD）的单次跨膜蛋白，其胞内段包含一个PDZ（postsynapticdensity95（PSD-95）/disclarge/zonulaoccludens-1）蛋白结合结构域，能够介导DGCR2与PSD中脚手架蛋白PSD-95结合。利用免疫共沉淀（co-Immunoprecipitation,co-IP）发现P429R突变也不影响DGCR2与PSD-95的结合。SCZ被认为是一种神经发育障碍，我们发现DGCR2的表达在出生后神经突起以及突触发育的关键时期有所升高。最后，利用shRNA（shorthairpinRNA,短发夹RNA）对原代培养海马神经元中DGCR2的表达进行敲减（knockdown），通过ICC发现DGCR2表达的敲减引起神经元树突长度、分支的减少，以及树突棘密度的降低。这些DGCR2敲减引起的神经元发育缺陷能够被过表达DGCR2-WT所改善，但P429R突变体却没有改善作用。这些发现提示DGCR2具有调节神经元树突以及树突棘发育的功能，而P429R突变则可能损害DGCR2对神经元发育的调节功能，从而可能参与SCZ的发病过程。我们的研究为探索SCZ易感基因DGCR2在SCZ中的病理生理功能提供了新的线索，也为阐述SCZ发病的分子机制提供了新的思路。 收起