摘要: miRNA是一类长度约为20～24个核苷酸的小分子非编码RNA家族，它通过调控靶基因转录后的表达而在多种生物学途径中发挥作用。前期研究发现，鸡胚性腺早期发育过程中存在性别差异表达的miRNA，但对于其靶标的识别以及它在鸡胚性腺分化中的调控作用还未确... 展开 miRNA是一类长度约为20～24个核苷酸的小分子非编码RNA家族，它通过调控靶基因转录后的表达而在多种生物学途径中发挥作用。前期研究发现，鸡胚性腺早期发育过程中存在性别差异表达的miRNA，但对于其靶标的识别以及它在鸡胚性腺分化中的调控作用还未确定。为研究 miRNA在鸡胚早期性分化过程调控的靶基因，探讨 miRNA在性腺早期发育中的作用，本研究以前期筛选出的鸡胚早期性别差异表达miRNAs为研究对象，首先通过定量PCR和WISH方法验证miRNA的表达，然后通过生物信息学结合实验验证的方法对候选miRNA的靶基因进行了分析。本研究所取得的结果如下： 1．应用定量RT-PCR方法检测了5个miRNAs在性分化关键期（E3.5~6.5d）雌、雄鸡胚中的表达。结果表明，miR-92在所检测的各时期（除E4.5d外）中的表达均为雄性极显著高于雌性(P<0.01)，miR-2954的表达则是在E4.5d雄性中极显著高于雌性(P<0.01)；另外，miR-107、1767和31这3个miRNAs呈现前期（E3.5～4.5d）雌性高表达后期（E5.5～6.5d）雄性高表达的趋势。 2．利用WISH方法构建了雄性高表达的miR-92的空间表达谱。结果表明miR-92在E5.5、6.5 d胚胎UGSs/性腺部位的表达均为雄性高于雌性，且性腺部位表达明显高于UGSs部位。 3．通过TargetScan和miRDB对miR-92进行靶基因预测，结合功能分析、miRNA与靶基因形成二级结构及自由能的结果，初步选定ATRX为miR-92在鸡性腺发育中可能调控的靶基因。 4．通过双荧光素酶报告基因法对生物信息学预测的靶基因进行验证，结果表明miR-92能显著抑制融合ATRX3’UTR的报告基因的荧光表达量(P<0.01)，说明ATRX可能是miR-92的靶基因。 5．通过半定量方法检测ATRX在性分化关键期（E3.5~6.5d）雌、雄鸡胚性腺中的表达，结果表明它与miR-92在各时期（除4.5d）的表达趋势相反，故推测miR-92可能通过抑制靶基因ATRX的表达来调控鸡的性腺发育。 收起