摘要: 目的：在心脏发育过程中，TnI基因呈现动态表达过程，但其调控机制目前尚不清楚。本研究以小鼠为研究对象，探讨TnI基因时序性表达过程中DNA甲基化的调控作用。 方法：应用DNA甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸盐测序（BSP）技术分别检测胚胎14.5、1... 展开 目的：在心脏发育过程中，TnI基因呈现动态表达过程，但其调控机制目前尚不清楚。本研究以小鼠为研究对象，探讨TnI基因时序性表达过程中DNA甲基化的调控作用。 方法：应用DNA甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸盐测序（BSP）技术分别检测胚胎14.5、17.5天（E14.5、E17.5），新生1天（NB），生后7天、14天（P7、P14）及成年小鼠心脏中ssTnI和cTnI启动子区域CpG岛及CpG位点甲基化水平。应用逆转录PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫沉淀（Westernblot）技术检测上述6个时间点中小鼠心脏ssTnI及cTnImRNA和蛋白质表达水平。 结果： 1.RT-PCR结果显示NB、P7、P14、成年组ssTnImRNA表达量分别为：0.939±0.048、0.661±0.121、0.070±0.022、0.003±0.001，较E17.5（1.251±0.054）明显降低（P＜0.05），呈现逐渐降低的趋势；而P14、成年组cTnImRNA表达量分别为：1.415±0.223、2.959±0.192较P7（0.825±0.095）明显升高（P＜0.05），呈现逐渐增高的趋势。 2.Westernblot结果显示E17.5、NB、P7、P14、P21组ssTnI蛋白质表达分别占TnI总量的90%、60%、45%、35%、0%（P＜0.05），呈逐渐降低的趋势；cTnI蛋白在E17.5、NB、P7、P14、P21组分别占TnI总量的10%、40%、55%、65%、100%（P＜0.05），呈逐渐升高的趋势。 3.甲基化特异性PCR（MSP）结果显示ssTnICpG位点在E14.5、E17.5、NB组中M引物无条带，U引物出现扩增条带；P7、P14组中M引物、U引物均存在扩增条带；成年组中仅有M引物出现扩增条带，U引物无条带；而ssTnI、cTnICpG岛以及cTnICpG位点在上述六个时间点中仅M引物出现扩增条带，U引物无条带。 4.亚硫酸盐测序（BSP）结果显示ssTnICpG位点甲基化率在E14.5、E17.5、NB组中均为0%，在P7、P14、成年组分别为20%、50%、80%（P＜0.05），呈逐渐升高的趋势；而ssTnI、cTnICpG岛以及cTnICpG位点在此6个时间点中甲基化率分别为100%、90%、67%。 结论： 1.小鼠心脏发育过程中ssTnI基因mRNA及蛋白表达水平在出生后逐渐降低，而cTnI基因mRNA和蛋白表达水平逐渐增高，两者存在时序性表达差异。 2.ssTnICpG位点甲基化出生后呈现逐渐增高的趋势，提示其可能是ssTnI基因表达下调的机制之一；而ssTnICpG岛甲基化无明显时序性改变。 3.cTnICpG岛及cTnICpG位点甲基化在心脏发育过程中无时序性改变。 收起