摘要: 目的：检测MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3及Col-II细胞外基质因子在兔关节软骨细胞划伤后不同时间点的表达变化。 方法：从成年的新西兰大白兔的膝关节股骨下端关节面分离出关节软骨组织，进行原代六孔板培养。待细胞长出基本完全融合时，将培养的细... 展开 目的：检测MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3及Col-II细胞外基质因子在兔关节软骨细胞划伤后不同时间点的表达变化。 方法：从成年的新西兰大白兔的膝关节股骨下端关节面分离出关节软骨组织，进行原代六孔板培养。待细胞长出基本完全融合时，将培养的细胞分成4组。分别为正常组，损伤后1、3、7天组。第1组不做任何处理，留作正常对照；第2至4组细胞使用无菌10μl枪头在六孔板中呈“#”字划伤，在划痕过程中，力度与速度一致，其中，间距为0.5 cm。采用实时PCR检测1、3、7和0天时间点基质金属蛋白酶-2、3和9，基质金属蛋白酶抑制物-3及II型胶原相对表达水平。 结果：成功获取软骨，经原代培养后成功建立损伤细胞模型。MMP-2 mRNA表达水平在损伤后1，3，7天均比正常组升高，其中第7天最高(P<0.05)。MMP-3 mRNA表达水平在细胞损伤后第1，3，7天均比正常组明显下降，第7天最低(P<0.05)。 MMP-9 mRNA表达水平在损伤后第1，3，7天均比正常组升高，第3天最高，随之开始下降(P<0.05)。TIMP-3 mRNA表达水平在损伤后第1，3，7天均比正常组下降，第7天水平最低(P<0.05)。Col-II mRNA表达水平在损伤后第1，3，7天均比正常组升高，第1天达到最高(P<0.05)。 结论：ECM相关基因在细胞损伤后的不同时间点存在不同表达行为，这可为调节细胞外基质基因选择合适的靶基因与时间窗，促进受损的关节软骨愈合奠定实验基础。 收起