摘要: 棉花黄萎病严重威胁我国棉花可持续生产，但由于该病害是土传系统性、病原菌寄主范围广、病原菌休眠体微菌核长期存活于土壤中导致控制病害十分困难，而且种质资源中抗病品种的稀缺使得常规杂交育种控制该病害的方法变的收效甚微。 本研究利用本课... 展开 棉花黄萎病严重威胁我国棉花可持续生产，但由于该病害是土传系统性、病原菌寄主范围广、病原菌休眠体微菌核长期存活于土壤中导致控制病害十分困难，而且种质资源中抗病品种的稀缺使得常规杂交育种控制该病害的方法变的收效甚微。 本研究利用本课题组前期中植棉KV-3接黄萎病菌与未接黄萎病菌后转录组测序结果，筛选23个介导植物与病菌互作和激素代谢途径的差异表达抗黄萎病相关基因，其中包含20个上调基因和3个下调基因，分别对其抗黄萎病功能进行了分析，取得了的结果如下： 1.通过荧光定量 PCR技术比较分析了23个基因在不同抗感材料的表达差异，结果显示，上调基因在高抗品种和感病品种中都诱导表达，但在高抗品种中，其表达量能更迅速和更高的诱导表达，对于下调基因，在高抗品种和感病品种中表达都受到抑制，但是在高抗品种中，受抑制的程度更大。 2.利用病毒诱导的基因沉默技术研究了23个抗黄萎病相关基因在抗黄萎病中的功能，研究结果显示，20个上调基因中分别沉默后抗病品种抗病性丧失，3个下调基因分别沉默后感病品种抗病性增强。 3.通过cDNA末端快速扩增技术技术成功克隆了抗黄萎病相关基因GhB2全长，分析发现， GhB2 ORF全长969bp，编码322个氨基酸，5’UTR182bp，3’UTR324bp，N端存在保守的FGLP和LFL序列，C端存在保守的PAQV和PLxE序列，是典型的DCD超家族结构域。构建系统发育树显示，GhB2与雷蒙德氏棉、亚洲棉和可可中的B2蛋白具有较高的同源性，GhB2的理论分子量为35.98 kD，理论等电点为8.75。预测GhB2不含信号肽和跨膜结构，组织特异性表达分析显示其在根、茎和叶中表达量较高，而在花中表达量较低。 4.利用超表达技术，采用浸花法转化野生型拟南芥，筛选阳性植株进行了抗黄萎病鉴定，结果显示，超表达GhB2拟南芥的病指为16.95，与野生型和转化空载体拟南芥的34.56和40.04相比，显著增加了对黄萎病菌的抗性（P<0.05），表明GhB2介导了拟南芥对黄萎病的抗病过程。 收起