摘要: 目的：研究青蒿酸(AA)对长春花试管苗、干细胞萜类吲哚生物碱生物合成的诱导作用和调控机理。 方法：(1) AA对长春花试管苗生物碱含量的影响：长春花试管苗预培养20d，喷洒AA，使AA终浓度为10mg/L，诱导培养24、72h采收，显微观察叶片微观结构，离... 展开 目的：研究青蒿酸(AA)对长春花试管苗、干细胞萜类吲哚生物碱生物合成的诱导作用和调控机理。 方法：(1) AA对长春花试管苗生物碱含量的影响：长春花试管苗预培养20d，喷洒AA，使AA终浓度为10mg/L，诱导培养24、72h采收，显微观察叶片微观结构，离子对萃取紫外可见分光光度法测定总生物碱含量，HPLC测定文多灵、长春质碱等生物碱含量；(2) AA对长春花悬浮干细胞生物碱含量的影响：长春花悬浮干细胞预培养9d，添加AA，使AA终浓度为5、10、20、30mg/L，诱导培养6、12、24、48h采收，HPLC测定文多灵、长春质碱、阿吗碱含量；(3) AA调控机理考察---是否通过十八烷酸途径起诱导作用：长春花悬浮干细胞预培养9d，添加AA，使AA终浓度为10mg/L，诱导培养3、6、12、24h采收，荧光素二乙酯测定细胞活力，qRT-PCR测定关键基因的转录水平，JA ELISA试剂盒测定茉莉酸含量，十八烷酸途径抑制剂法测定AA是否通过十八烷酸途径起诱导作用；(4) AA调控机理考察---是否与钙离子内流相关：长春花悬浮干细胞预培养9d，单独或联合添加钙离子螯合剂、钙离子阻滞剂，诱导培养12h采收，HPLC测定文多灵、长春质碱含量。 结果：(1)AA(10mg/L)作用24h，可以使长春花试管苗叶片气孔开度变大，总碱含量提高30.64%，文多灵含量提高15.06%，长春质碱含量提高45.37%，长春碱含量提高87.27%。(2)AA(10mg/L)作用6h，长春花悬浮干细胞中长春质碱的含量为94.15μg/g，与对照组相比提高了251.04%；AA(20mg/L)作用6h，长春花悬浮干细胞中文多灵的含量为659.17μg/g，与对照组相比提高了234.52%；AA可致长春花悬浮干细胞细胞活力略有下降。(3)AA作用下，长春花悬浮干细胞细胞中转录因子ORCA3表达量最高提高752%；TDC、STR、D4H关键酶基因的转录水平也有不同程度的提高；JA ELISA实验揭示茉莉酸含量与是否添加AA无关；十八烷酸途径抑制剂不能抑制AA对长春花悬浮干细胞生物碱的诱导作用。(4)钙离子螯合剂及钙离子通道阻滞剂会抑制AA的诱导作用。 结论：AA具有诱导长春花试管苗/干细胞中萜类吲哚生物碱合成的作用，其调控机理不是通过十八烷酸途径而与钙离子内流正相关。 收起