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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 基因组印记是指来自双亲的等位基因通过DNA或组蛋白的表观遗传修饰而产生的亲本等位基因差异表达的现象。父源等位基因沉默,而母源等位基因表达的基因称为父源印记基因;反之,则为母源印记基因。印记基因在染色体上成簇分布且高度保守。目前,在人和... 展开 基因组印记是指来自双亲的等位基因通过DNA或组蛋白的表观遗传修饰而产生的亲本等位基因差异表达的现象。父源等位基因沉默,而母源等位基因表达的基因称为父源印记基因;反之,则为母源印记基因。印记基因在染色体上成簇分布且高度保守。目前,在人和小鼠中被鉴定的印记基因总数超过200个,而牛中印记基因的研究相对较少。 本研究选取位于Dlk1-Dio3印记域中在鼠中被鉴定为印记基因的Dio3和Dio3os基因,以及在人胚胎中被鉴定为印记基因的Wif1基因为研究对象,通过RT-PCR方法首先分析了Dio3、Dio3os和Wif1基因在成年奶牛7个组织中的表达,结果表明这3个基因在成年牛的心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌和脂肪组织都表达。进一步应用基于SNP(single nucleotide polymorphism)位点的测序法分析等位基因的表达。利用PCR产物直接测序的方法寻找Dio3、Dio3os和Wif1基因的SNP位点,确定杂合子。通过RT-PCR产物直接测序法检测这三个基因在杂合子牛的等位基因的特异表达,发现Dio3和Dio3os基因在成年牛组织中表现为单等位基因表达。Wif1基因在肺中表现为单等位基因表达,在心、肝、脾、肾、肌肉、和脂肪中表现为双等位基因表达。 为了分析DNA甲基化在调控Wif1基因组织特异性印记中的可能作用,应用亚硫酸氢盐测序法分析Wif1基因启动子区29个CpG位点在牛单等位基因表达的肺脏和双等位基因表达的肝脏组织中等位基因特异的甲基化状态。结果发现,在肺脏和肝脏中,两条亲本链间的甲基化水平无显著差异(p>0.05)。进一步分析肺脏和肝脏中每个CpG位点亲本链间甲基化率差异,与双等位基因表达的肝脏相比,肺脏中存在8个亲本链间甲基化率差异显著的CpG位点,其中3个(第1、2和6)位于转录因子的结合位点上,由于单个CpG位点的甲基化变化会影响转录因子的结合,推测这3个CpG位点的甲基化可能参与调控Wif1基因的组织特异性印记。 收起
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