摘要: 目的:观察不同年龄组腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺动脉结构的变化，探讨年龄因素对腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺血管重建的影响及可能的机制。 方法:实验设定三个年龄组:A组即6-8周组，B组即30-40周组和C组即80-120周组，每个年龄组分为敲除组（A-/-，... 展开 目的:观察不同年龄组腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺动脉结构的变化，探讨年龄因素对腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺血管重建的影响及可能的机制。 方法:实验设定三个年龄组:A组即6-8周组，B组即30-40周组和C组即80-120周组，每个年龄组分为敲除组（A-/-，B-/-，C-/-）和野生组(A+/+，B+/+，C+/+)，共6组，每组6只雄性小鼠。在SPF级动物房饲养到相应年龄段后，用10％水合氯醛(0.1ml/10g)腹腔注射麻醉，取腹腔静脉血，处死动物取心肌，分离右心室(RV)和左心室加室间隔(left ventricle+septum，LV+S)，并用滤纸吸干血液，称量分离后的两部分心脏重量，计算右心室肥厚指数RV/(LV+S)。使用分光光度计测定血浆H2S的水平;肺组织切片采用苏木精一伊红（HE）染色，Weigert弹力染色观察肺组织病理学变化、肺血管重建和弹力纤维的变化;Image-proplus(IPP)图像分析技术测定小鼠肺小动脉管壁厚度指标(管壁厚度占外径的百分比(WT％)和管壁面积占总面积的百分比(WA％)); RT-PCR法测肺组织低氧诱导因子-1α（Hypoxia induce factor-1α，HIF-1α），血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)的表达;免疫组化染色法定性观察小鼠肺小动脉管壁HIF-1α和VEGF蛋白表达变化。 结果: 1.RV/(LV+S):B-/-组较B+/+组，C-/-组较C+/+组RV/(LV+S)比值增高（P＜0.05）;A-/-组与A+/+组比较RV/(LV+S)比值无明显变化(P＞0.05);C-/-组较B-/-、A-/-组RV/(LV+S)比值增高(P＜0.05); B-/-组较A-/-组RV/(LV+S)比值增高(P＜0.05)。 2.WA％，WT％:B-/-组较B+/+组，C-/-组较C+/+组WA％，WT％的值增高（P＜0.05）;A-/-组与A+/+组比较WA％，WT％的值无明显变化(P＞0.05);C-/-组较B-/-、A-/-组WA％，WT％的值增高(P＜0.05);B-/-组较A-/-组WA％，WT％的值增高(P＜0.05)。 3.血浆硫化氢:B-/-组较B+/+组，C-/-组较C+/+组血浆硫化氢水平降低（P＜0.05);A-/-组与A+/+组比较血浆硫化氢水平无明显变化(P＞0.05);C-/-组较B-/-、A-/-组血浆硫化氢水平降低(P＜0.05);B-/-组较A-/-组血浆硫化氢水平降低(P＜0.05)。 4.HIF-1α mRNA，VEGFmRNA and CSEmRNA: B-/-组较B+/+组，C-/-组较C+/+组，肺组织HIF-1α mRNA和VEGFmRNA表达增高(P＜0.05)，CSEmRNA表达降低(P＜0.05);A-/-组与A+/+组比较肺组织HIF-1α mRNA，VEGFmRNA和CSEmRNA表达无明显差异(P＞0.05);C-/-组较B-/-、A-/-组肺组织HIF-1α mRNA和VEGFmRNA表达增高(P＜0.05)，CSEmRNA表达降低(P＜0.05);B-/-组较A-/-组肺组织HIF-1α mRNA和VEGFmRNA表达增高（P＜0.05），CSEmRNA表达降(P＜0.05)。 5.HIF-1α蛋白:HIF-1α蛋白在野生组小鼠的肺血管中几乎无表达;HIF-1α蛋白在A-/-组肺血管表达甚少，在B-/-组和C-/-组肺血管表达渐增多。 6.VEGF蛋白:随着周龄增加，敲除组肺小血管VEGF蛋白表达渐增多，野生组无明显变化，B-/-组较B+/+组，C-/-组较C+/+组比较，肺小血管VEGF蛋白表达增多。 结论: 1.腺苷A2A受体基因敲除小鼠存在肺血管重建及右心室肥厚现象，提示在生理情况下，腺苷A2A受体对维持正常肺动脉结构及稳定肺动脉压具有重要作用。 2.随着年龄增加，腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺血管重建及右心室肥厚现象愈加明显。可见年龄因素对腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺血管重建及肺动脉压产生重要的影响。 3.随着年龄增加，腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺组织HIF-1α和VEGF表达增高，CSE表达下降，血浆H2S水平下降。可见HIF-1α和VEGF合成增多，CSE和H2S合成减少在腺苷A2A受体基因敲除小鼠的肺血管重建和右心肥厚发病过程中起重要作用。 收起