摘要: 由于目前尚没有可治愈艾滋病的特效药物和有效预防艾滋病的疫苗，研发高效低毒的新型抗HIV-1药物具有重要的科学意义和应用价值。整合酶被认为是抗HIV-1药物研究的理想靶点之一。本研究的目的是建立便捷高效的整合酶去整合反应抑制剂筛选方法。 将... 展开 由于目前尚没有可治愈艾滋病的特效药物和有效预防艾滋病的疫苗，研发高效低毒的新型抗HIV-1药物具有重要的科学意义和应用价值。整合酶被认为是抗HIV-1药物研究的理想靶点之一。本研究的目的是建立便捷高效的整合酶去整合反应抑制剂筛选方法。 将HIV-1整合酶及整合酶核心区原核表达载体分别转化入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)进行原核表达。用亲和层析方法纯化得到重组蛋白。活性鉴定结果表明，重组蛋白的活性与预期相符，可用于HIV-1 IN去整合反应抑制剂体外筛选方法的建立。设计了带有荧光标记的去整合反应DNA底物，用链霉亲和素磁珠捕获反应体系中的DNA产物。最后用荧光分析仪检测DNA产物的荧光信号，并计算待测样品的抑制率。用已知的整合酶去整合反应抑制剂黄芩素对本筛选方法进行验证，测定结果与已有实验数据相当，表明本筛选方法能够有效应用于HIV-1整合酶去整合反应抑制剂的筛选。与现有的整合酶去整合反应抑制剂筛选方法相比，本筛选方法步骤更为简化、耗时更短、成本更低。 另外，本研究还对分子生物学与基因工程中常用的DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA切胶回收、蛋白质快速检测、微生物液体样品分布等基本实验技术和装置进行了改进，提高了实验效率，具有较高的推广价值。以上技术改进已申报专利。 收起