摘要: 油松毛虫(Dendrolimus fabulaeformis Tsai et Liu)和日本龟蜡蚧(Ceroplastesjaponicus Green)是农林业的重大害虫，传统的化学防治手段存在农药残留，环境污染，杀伤天敌和害虫产生抗药性等问题。采用病原菌进行生物防治具有没有污染、防治靶标害虫专... 展开 油松毛虫(Dendrolimus fabulaeformis Tsai et Liu)和日本龟蜡蚧(Ceroplastesjaponicus Green)是农林业的重大害虫，传统的化学防治手段存在农药残留，环境污染，杀伤天敌和害虫产生抗药性等问题。采用病原菌进行生物防治具有没有污染、防治靶标害虫专一性强和致死效果好等优点，然而病原菌在侵染昆虫的过程中会受到昆虫免疫系统的抵抗，因此，研究昆虫感染病原菌后的免疫反应能对应用病原菌防治害虫提供理论依据。本论文研究了油松毛虫和日本龟蜡蚧受病原菌入侵后的免疫反应，其内容包括两部分。 1.油松毛虫抗菌物质及其抗菌活性的研究采用体内注射法，对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformis3龄幼虫注射浓度为1.0×108个/mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液，使其诱导产生抗菌物质，12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌活性，并检测温度、pH值变化和反复冻融对抗菌活性的影响。采用Tricine-SDS-PAGE电泳法确定抗菌物质的分子量大小。结果发现，诱导后的油松毛虫3龄幼虫血淋巴粗提液对试验的细菌和真菌均有不同程度的抑制作用，其中对革兰氏阴性细菌大肠杆菌(Escherichicha coli)和变形杆菌(Proteus species)的抑制作用强于革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。血淋巴粗提液的的抗菌活性在50℃水浴和pH值在4-9的条件下保持稳定，反复冻融1-5次其抗菌物质的活性仅降低4.3-14.9％。电泳结果显示，诱导组血淋巴提粗液在23.2KDa和15.0KDa处分别出现一条特异性条带，在60.4KDa处蛋白带变浅。由此推测从油松毛虫幼虫体内诱导产生的抗菌物质可能是分子量为23.2KDa和15.0KDa的抗菌肽或者抗菌蛋白。 2.日本龟蜡蚧对蜡蚧轮枝菌感染的免疫反应研究研究了蚧虫病原真菌蜡蚧轮枝菌的生物学特性，结果表明温度和湿度对蜡蚧轮枝菌孢子的萌发，菌丝的生长和发育有明显的影响。蜡蚧轮枝菌孢子萌发、生长和产孢的适宜条件为:相对湿度95％、温度为25℃。蜡蚧轮枝菌菌株菌丝生长的适温范围是20-30℃。产孢量为是4.31×106-4.57×108个/mL。 在温度为25±1℃，相对湿度95±5％的条件下用不同浓度的孢子悬液感染日本龟蜡蚧，相同感染时间下，孢子浓度与虫体死亡率呈正相关，侵染死亡率最高为91.2％。初步观察了蜡蚧轮枝菌感染日本龟蜡蚧的入侵特点以及日本龟蜡蚧染菌后的罹病症状，发现在阴门区菌丝较多，虫体边缘与蜡壳之间有分离的缝隙出现，内部器官和组织严重萎缩、黑化，蜡壳颜色也呈现污浊状。 采用分光光度法测定了日本龟蜡蚧被蜡蚧轮枝菌感染后保护酶和抗菌物质的活性，结果表明:被蜡蚧轮枝菌感染后第1-8d，感染虫体内超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著高于未感染的虫体，并呈现出先升高后下降的变化趋势，而未感染虫体的变化不大;过氧化氢酶(CAT)及多酚氧化酶(PPO)的活性变化趋势与SOD的相似。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分析了日本龟蜡蚧感染蜡蚧轮枝菌后1-8d体内SOD同工酶与CAT同工酶的变化，发现SOD和CAT同工酶带宽与酶带亮暗均变化显著。 测定了日本龟蜡蚧被蜡蚧轮枝菌感染后体内蛋白质含量和血淋巴抗菌物质的变化。结果表明:被蜡蚧轮枝菌感染后1-8d，虫体内总蛋白质和含量逐渐减少，而未感染的则变化不大;染菌后第2d，日本龟蜡蚧血淋巴内新产生了分子量为16.8KDa的蛋白质，说明蜡蚧轮枝菌侵染日本龟蜡蚧的过程中，能够分解其体内的蛋白质，并诱导血淋巴产生抗菌物质。 收起