摘要: 目的：用携带骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因的慢病毒病毒载体转染SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)，接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸（nHAC/PLA）材料构建组织工程骨，体外观察成骨表达情况。 方法：体外分离、培养SD大鼠骨髓基质干细胞，传代培养... 展开 目的：用携带骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因的慢病毒病毒载体转染SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)，接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸（nHAC/PLA）材料构建组织工程骨，体外观察成骨表达情况。 方法：体外分离、培养SD大鼠骨髓基质干细胞，传代培养后分为A、B、C组。A组为BMP-2和eGFP 转染组；B组为空慢病毒病毒载体转染组；C组为未转染组。取携带BMP-2和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的慢病毒 (MOI=25pfu/cell)感染SD大鼠BMSCs。荧光显微镜下观察eGFP的表达,判断感染效率及细胞生长情况。通过噻唑篮（MTT）和流式细胞仪（FCM）检测转染后细胞生长增殖活力及对细胞周期的影响。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化和酶联免疫吸附反应（ELISA）检测BMP-2蛋白的表达。转染成功后接种于nHAC/PLA支架,构建组织工程骨。碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测ALP 活性，茜红素染色检了解成骨情况；扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长和合成分泌骨基质的情况。 结果：①经密度梯度离心法分离、贴壁筛选、培养所获的细胞，经鉴定是鼠的BMSCs，并且能大量增殖。②慢病毒感染后BMSCs 形态特征、细胞增殖情况及细胞周期与未转染组相比无显著变化。③基因转染后48h，RT-PCR、免疫组化和 ELIASA 都能检测到BMP-2基因的转录及表达，而空载体转染组及未转染组未见其转录及表达，差异均有显著性意义(P<0.05)。④ BMP-2 转染的BMSCs 具有成骨细胞的结构特征和生物学特性；转染后的BMSCs的ALP 均较空转染组和未转染组有显著增高，差异均有显著性意义(P<0.05)。⑤ BMP-2基因修饰的BMSCs在nHAC/PLA 支架表面和孔隙内黏附、生长良好，仍可高水平表达BMP-2蛋白。 结论：①慢病毒携带BMP-2基因可有效感染SD大鼠BMSCs 并使BMP-2 获得稳定大量表达；② BMP-2基因转染后的BMSCs 向成骨细胞方向分化加快，并具有具有典型成骨细胞的形态学特征和较强的生物学活性；③ BMP-2基因修饰的BMSC在nHAC/PLA 支架中黏附、生长良好，继续高水平表达并分泌BMP-2，组织工程骨构建获得初步成功；④ nHAC/PLA是一种良好的骨组织工程的载体材料。 收起