摘要: 三氧化二砷(As203)作为抗肿瘤药物受到了广泛的关注。最初，As203被用于早幼粒型白血病的治疗，且疗效显著。之后，研究人员逐渐开始研究其杀伤实体瘤细胞的能力及机制。 我们通过MTT实验发现，As203在一定浓度范围内特异的抑制肝癌细胞BEL-7402的... 展开 三氧化二砷(As203)作为抗肿瘤药物受到了广泛的关注。最初，As203被用于早幼粒型白血病的治疗，且疗效显著。之后，研究人员逐渐开始研究其杀伤实体瘤细胞的能力及机制。 我们通过MTT实验发现，As203在一定浓度范围内特异的抑制肝癌细胞BEL-7402的增殖而对正常肝细胞L-02的增殖没有显著的影响。形态学观察发现，6μM和12μM的As203可以以剂量依赖的方式诱导BEL-7402细胞产生核凝集现象，而不能使L-02细胞产生核凝集。这就从表型上说明了，As203在一定浓度范围内特异的诱导BEL-7402细胞发生凋亡。在此基础上，对凋亡相关蛋白水平的免疫印记分析表明，As203可以以剂量依赖的方式下调Bcl-2和Survivin的表达，上调Bax的表达以及下调procaspase-3的表达。同时，在As203处理的BEL-7042中检测到了活性caspase-3和被切割的PARP-1的表达。对于L-02细胞的检测则发现，As203只有在12μM的时候才能够略微下调Survivin的表达并略微上调Bax的表达，除此之外，对其他凋亡相关蛋白的水平则没有影响。这就从分子水平证明了As203在一定浓度范围内特异的诱导BEL-7402细胞发生凋亡，并提示我们，As203可以通过影响Bcl-2家族蛋白来激活线粒体凋亡通路，同时抑制凋亡抑制蛋白的表达，从而最终激活caspase-3。 为了进一步研究BEL-7402细胞和L-02细胞在信号通路方面对As203是否也存在不同的反应机制，我们利用蛋白免疫印记实验对MAPK信号通路以及NF-κB信号通路上的关键蛋白进行检测。结果表明，As203可以以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞中ERK1/2的活性，同时激活p38的表达。结果说明，As203可以通过抑制ERKl/2来抑制细胞的增殖，同时通过激活p38来诱导凋亡。对NF-κB信号通路的检测发现，As203可以磷酸化BEL-7402细胞中的κB，但是没有影响p65和p50蛋白水平。结果说明，BEL-7402中的NF-κB通路对As203的刺激作出了反应。但是对L-02的检测结果则显示，As203没有对其MAPK和NF-κB信号通路产生影响。 12μMAs203处理1hr，3hr和5hr后，BEL-7402细胞中ROS水平出现时间依赖的升高，而L-02细胞中ROS的水平则没有变化。而BEL-7402和L-02细胞中还原型谷胱甘肽含量，过氧化氢酶活性以及超氧化物歧化酶-I(SOD-1)的表达都没有明显差异，As203处理后也表现出相同的变化趋势。利用荧光素酶活性分析发现，As203还可以剂量依赖的抑制BEL-7402中HIF-1α的转录活性，并能够上调L-02中HIF-1α的转录活性。这说明HIF-1α也参与了As203诱导BEL-7402凋亡的过程，也可能在L-02抵抗As203中发挥作用。 对多药耐药相关蛋白MRP-1以及LAPTM4B检测结果发现，L-02细胞中MRP-1的表达高于BEL-7402。沉默L-02细胞中的MRP-I可以显著提高L-02对As203的敏感性。As203还可以降低BEL-7402细胞中LAPTM4B的蛋白水平。这说明，多药耐药相关蛋白在L-02抵抗As203过程中发挥了至关重要的作用。 我们还利用去甲斑蝥素(NCTD)和As203联合用药作用于肝癌BEL-7402细胞，检测NCTD能否和As203起到协同作用，增强疗效。结果显示，4μg/mL和6μg/mL的NCTD与2μM的As203联合用药可以起到协同作用。而且4μg/mL NCTD和2μM As203联合用药可以显著的将细胞阻断于M期，并诱导细胞出现明显的核凝集现象。蛋白免疫印记实验证明，4μg/mL NCTD和2μM As203联合用药可以下调p65和p50的蛋白水平，并且可以诱导caspase-3/9的活化以及PARP-1的切割。这些结果说明了，NCTD和As203联用可以起到协同作用，抑制BEL-7402细胞增殖，诱导BEL-7402细胞凋亡，并且其抑癌作用部分上可能是通过影响NF-кB通路来实现的。 收起