摘要: 电化学免疫分析法由于仪器设备简单，分析速度快，灵敏度高，线性范围宽等优点，越来越受到科研工作者的广泛关注。本论文研制了基于聚硫堇戊二醛自组装蛋白质的新体系，采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体，使用双抗体夹心法对甲胎蛋白（AFP）的进行... 展开 电化学免疫分析法由于仪器设备简单，分析速度快，灵敏度高，线性范围宽等优点，越来越受到科研工作者的广泛关注。本论文研制了基于聚硫堇戊二醛自组装蛋白质的新体系，采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体，使用双抗体夹心法对甲胎蛋白（AFP）的进行检测。此外，在光照情况下，加入二茂铁，使之与聚硫堇-纳米金-抗体修饰电极发生光诱导反应，制成一种新型的光电免疫传感器，并考察了该传感器的工作条件及其的响应性能。在最佳实验条件下，分别测定了甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）的线性范围及检测限。结果表明，该方法灵敏度高，分析快速、简便，在生物分析中具有广阔的应用前景。 本文主要开展了以下几个方面的工作： 一、基于电聚合硫堇膜的伏安型酶联免疫新体系的研究及应用 将硫堇电聚合到铂电极表面形成聚硫堇膜，通过戊二醛自组装蛋白质，使酶标抗体与相应的抗原发生免疫反应时催化底物氧化聚硫堇，以聚硫堇膜电极的还原电流表达抗原的量，从而制得高灵敏度的甲胎蛋白免疫传感器。通过循环伏安法及差分脉冲伏安法考察了电极表面的电化学行为，并对免疫传感器的性能进行了详细研究。在优化的实验条件下，伏安法检测甲胎蛋白的线性范围为5.00～200ng·mL-1，线性相关系数为0.9957，检测限为3.70 ng·mL-1。将该免疫传感器用于血清样品中AFP的检测，结果满意。 二、基于电聚合硫堇膜光电效应的新型免疫传感器的研制 在铂电极表面，通过聚合物膜大量的氨基活性基团，可以有效吸附纳米金，进而固定蛋白质，在底液中加入二茂铁，利用了修饰电极表面聚合物膜与二茂铁的光电效应，以聚硫堇膜电极的氧化电流表达抗原的量，从而制得高灵敏度的光电免疫传感器。同时，通过循环伏安法和电流-时间曲线考察了电极表面的电化学行为，并对光电免疫传感器的工作条件和响应性能进行了详细研究。这种传感器制作简单，而且在无酶的实验条件下，方法新颖，有一定的医学研究和临床检验研究价值。 三、基于电聚合硫堇膜光电效应的新型免疫传感器的应用 将该免疫传感器应用于甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）的免疫分析并对实际样品的进行检测，结果令人满意。在优化的实验条件下，光电法检测甲胎蛋白的线性范围为5.00-150ng·mL-1，其氧化峰电流的增量和浓度的线性方程为：y=0.1152 x一21.82，线性相关系数为0.9951，检测限为2.67 ng·mL-1。检测癌胚抗原的线性范围为5.00～80.0ng-mL-1，其氧化峰电流的增量和浓度的线性方程为：y=0.1464 x-14.86，线性相关系数为0.9978，检测限为3.26 ng·mL-1。 收起