摘要: 葡萄糖氧化酶是一种主要由霉菌产生的氧化酶类，是重要的食品添加剂和工具酶，具有广阔的应用前景。本实验利用一株实验室保存的黑曲霉Z-25作为生产菌株，通过培养条件优化提高了葡萄糖氧化酶的产量；通过对酶进行分离纯化，获得了电泳纯的酶，并对酶... 展开 葡萄糖氧化酶是一种主要由霉菌产生的氧化酶类，是重要的食品添加剂和工具酶，具有广阔的应用前景。本实验利用一株实验室保存的黑曲霉Z-25作为生产菌株，通过培养条件优化提高了葡萄糖氧化酶的产量；通过对酶进行分离纯化，获得了电泳纯的酶，并对酶的性质进行了研究。主要内容和结果如下： 以黑曲霉Z-25为实验材料，对其产葡萄糖氧化酶的摇瓶液体发酵条件进行了相关研究。先采用单因素试验确定了不同因素(葡萄糖浓度、有机氮源试验、际蛋白胨浓度、无机氮源试验、硫酸铵浓度、吐温80浓度)影响产酶的大致范围，正交试验结果表明，菌株Z-25产葡萄糖氧化酶的最佳培养基组合为：葡萄糖10%、(NH4)2SO40.5%、眎蛋白胨1.5%、吐温-803%。最佳外部发酵条件为：发酵7天、装液量50mL/250mL、接种量2.5%。培养基优化后的酶活力提高了2.4倍；发酵条件优化后的酶活力提高了19.6倍。 对葡萄糖氧化酶的纯化方法进行了研究。采用吐温80-硫酸铵分离体系，通过分级分离，一步纯化倍数达到15倍左右，接下来进行了Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-Sephacel离子交换层析两步处理后，获得纯的葡萄氧化酶。粗酶被纯化了约597倍，比活力达到了525U/mg，活性回收率为3%。 对葡萄糖氧化酶的酶学性质进行了研究，结果表明：所获得葡萄糖氧化酶的分子量为160kDa，由两个80kDa的亚基组成。最适反应温度是40℃，最适反应pH为5.5；该酶在酸性条件下的pH稳定性较好，在pH3-pH5的范围内，室温下放置10小时后，酶的活性仍保持在70%以上。酶的热稳定性较好，在50℃保温1小时，酶活力仍保持在80%以上。Cu2+对酶有强烈的抑制作用，pb2+也表现出较强的抑制作用；而Ag+对酶的活性具有促进作用。按照Lineweaver-Burk作图法，测得该酶对β-D-葡萄糖的Km为0.01mmol/L，Vmax为25.12μmol·min-1ml/L。 收起