摘要: 目的：观察人外周血单核细胞和超高分子聚乙烯微粒(UHMWPE)与红霉素(EM)的混合培养，证实磨损微粒能够刺激单核细胞NF-κB表达，分析EM对单核细胞NF-κB p65亚基的细胞核内移位及NF-κB mRNA表达的影响，探讨EM抑制NF-κB的活化及NF-κB/P65 mRNA表达的机制... 展开 目的：观察人外周血单核细胞和超高分子聚乙烯微粒(UHMWPE)与红霉素(EM)的混合培养，证实磨损微粒能够刺激单核细胞NF-κB表达，分析EM对单核细胞NF-κB p65亚基的细胞核内移位及NF-κB mRNA表达的影响，探讨EM抑制NF-κB的活化及NF-κB/P65 mRNA表达的机制以及对关节假体的无菌性松动的防治作用，为临床应用EM防治人工关节无菌性松动提供理论依据和实践指导，使人工关节远期无菌性松动的保守治疗成为可能。 方法：实验共分为6组：分别为A组：单核细胞+RPMI1640培养基；B组：单核细胞+UHMWPE；C组：单核细胞+UHMWPE+帕米磷酸钠(10μg/ml)；D组：单核细胞+UHMWPE+EM(5μg/ml)：E组：单核细胞+UHMWPE+EM(10μg/ml)；F组：单核细胞+UHMWPE+EM(25μg/ml)。随机选择健康志愿者30例，每例采集外周血15 ml，肝素抗凝，应用梯度离心法分离出单个核细胞，并计数制成约4×105/ml的细胞悬液。在6孔板内分别各加入3ml的细胞悬液，在37℃、5％CO2的恒温恒湿细胞培养箱中培养4小时后，洗掉未贴壁细胞。按照每组方案施加不同的干预因素，即：A组仅加入培养基；B组加入UHMWPE；C组加入UHMWPE+帕米磷酸钠；D、E、F组则加入UHMWPE和不同浓度的EM溶液。使帕米磷酸钠浓度为10μg/ml，EM的浓度分别为5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml。然后置于细胞培养箱中，在相同条件下培养48小时后将细胞及培养基混合物离心，分别以蛋白质免疫印迹(Western Blotinging)检测细胞核内p65蛋白含量，细胞沉淀进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)实验以检测p65 mRNA的表达。 结果：UHMWPE组(B组)的细胞核内p65蛋白含量明显高于对照组A、C组，与EM联合培养的D、E、F组的p65蛋白含量明显低于UHMWPE刺激组，而C、F组及不同浓度EM的D、E组之间的p65蛋白含量的差异未见有统计学意义，但是随着药物浓度的增加，D、E、F组的p65蛋白含量逐渐减少；同样，B组的p65mRNA的表达呈强阳性，与A、C相比有显著性差异，与其他p65mRNA表达明显减弱的EM联合作用的D、E、F组相比亦有显著性差异，而A、C组及C、F组之间p65mRNA表达的差异未见有统计学意义。分析p65mRNA表达与胞核p65蛋白含量两者间的相互关系，发现单核细胞p65mRNA表达与胞核p65蛋白含量存在正相关性。 结论：本实验证实UHMWPE可以刺激单核细胞p65mRNA的表达增强，细胞核内p65蛋白含量增加，表明NF-κB是参与关节假体周围骨溶解的重要的信号传导因子，是引起关节假体中晚期无菌性松动的重要致动因素。本实验从基因转录、核因子激活转录水平表明在UHMWPE刺激下单核细胞可以增强p65mRNA表达及p65向细胞核内移位，EM可通过下调p65mRNA的表达，进而减少p65蛋白的合成以达到抑制NF-κB活化，从而对关节松动的防治起到一定的作用。 收起