摘要: 目的：观察人外周血单核细胞和骨水泥与淫羊藿总黄酮的混合培养，证实磨损微粒能够刺激单核细胞产生溶骨性因子，分析淫羊藿总黄酮对单核细胞分泌interleukin-6(IL-6)及IL-6mRNA表达的影响，探讨淫羊藿总黄酮抑制IL-6分泌及IL-6mRNA表达的机制以及对关... 展开 目的：观察人外周血单核细胞和骨水泥与淫羊藿总黄酮的混合培养，证实磨损微粒能够刺激单核细胞产生溶骨性因子，分析淫羊藿总黄酮对单核细胞分泌interleukin-6(IL-6)及IL-6mRNA表达的影响，探讨淫羊藿总黄酮抑制IL-6分泌及IL-6mRNA表达的机制以及对关节假体的无菌性松动的防治作用，为临床应用中药防治人工关节无菌性松动提供理论依据和实践指导，开辟祖国传统医药应用的新领域。 方法：实验共分为6组：分别为A组：单核细胞+RPMI1640培养基；B组：单核细胞+RPMI1640培养基(含有二甲基亚砜，DMSO)；C组：单核细胞+骨水泥(未聚合，下同)；D组：单核细胞+骨水泥+淫羊藿总黄酮(5mg/L)；E组：单核细胞+骨水泥+淫羊藿总黄酮(10mg/L)；F组：单核细胞+骨水泥+淫羊藿总黄酮(20mg/L)。在股骨颈骨折拟行人工关节置换的12例患者采集抽血30ml，肝素抗凝。应用梯度离心法分离出单个核细胞，并计数制成约5×106/ml的细胞悬液。在6孔板内分别各加入1.5ml的细胞悬液，在37℃、5％CO2的恒温恒湿细胞培养箱中培养4小时后，洗掉未贴壁细胞。按照每组方案施加不同的干预因素即：A组仅加入培养基；B组加入含有DMSO的培养基；C组加入骨水泥；D、E、F组则加入骨水泥和不同浓度的淫羊藿总黄酮溶液。使得骨水泥的终浓度为10mg/ml,淫羊藿总黄酮的浓度分别为5mg/L、10mg/L、20mg/L。然后置于细胞培养箱中，在相同条件下培养48小时后将细胞及培养基混合物离心，上清液以酶联免疫(夹心抗体法，EnzymeLinkedImmunosorbentAssay，ELISA)检测IL-6的含量，细胞沉淀进行做逆转录聚合酶链反应(ReverseTranscriptionPolymeraseChainRection，RT-PCR)实验以检测IL-6mRNA。 结果：骨水泥组的IL-6分泌量明显高于对照组A、B组(P＜0.01)，与淫羊藿总黄酮联合培养组的IL-6分泌量明显低于骨水泥强刺激组(P＜0.01)，而A、B两对照组及不同浓度淫羊藿总黄酮的D、E、F组之间的IL-6分泌量的差异未见有统计学意义(P＞0.05)，但是随着药物浓度的增加，D、E、F组的IL-6的分泌量逐渐减少；同样，骨水泥组的IL-6mRNA的表达呈强阳性，与A、B对照组相比有显著性差异(P＜0.02)，与其他IL-6mRNA表达明显减弱的淫羊藿总黄酮联合作用的D、E、F组相比亦有显著性差异(P＜0.02)，而A、B对照组及不同浓度淫羊藿总黄酮组之间IL-6mRNA表达的差异未见有统计学意义(P＞0.05)。 结论：本实验证实骨水泥微粒可以刺激单核细胞IL-6mRNA的表达增强，IL-6分泌量增加，表明IL-6是参与关节假体周围骨溶解的重要细胞因子，是引起关节假体中晚期无菌性松动的重要致动因素。本实验从基因转录、蛋白质细胞因子分泌水平表明在骨水泥刺激下单核细胞可以增强IL-6mRNA表达及IL-6分泌，淫羊藿总黄酮可通过下调IL-6mRNA的表达，进而减少IL-6的分泌以达到降低细胞因子的水平，从而对关节松动的防治起到一定的作用。 收起