摘要: [目的]本课题利用Fe<'3+>与Al<'3+>均为三价金属离子，且半径相似的特点，把DFP作为一种新型铝螯合剂进行研究。通过研究拟达到以下目的：1．建立一种新的合成DFP的方法；2．完成DFP的一般毒理学实验；3．对DFP的排铝效果从多方面进行研究；4．探讨DF... 展开 [目的]本课题利用Fe<'3+>与Al<'3+>均为三价金属离子，且半径相似的特点，把DFP作为一种新型铝螯合剂进行研究。通过研究拟达到以下目的：1．建立一种新的合成DFP的方法；2．完成DFP的一般毒理学实验；3．对DFP的排铝效果从多方面进行研究；4．探讨DFP对慢性荷铝动物的保护作用机制。为寻求一种价格低廉、安全有效的治疗铝中毒的药物提供理论依据。 [方法] 1．DFP的合成2-甲基-3-羟基-4-吡喃酮与甲胺水溶液于95～100℃加热回流，得到白色结晶即DFP。 2．DFP的毒理学实验 2．1 LD<,50>实验 取健康昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5个剂量组。以灌胃方式给药1次，观察1周(w)，记录动物死亡数。 2.2 外周血和骨髓微核实验 取健康昆明种小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分为5组：阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组、1/8LD<,50>组、1/4LD<,50>组、1/2LD<,50>组，分别于第二次与第七次给药后24h进行DFP的微核实验。 2.3 精子畸变实验 健康昆明种雄性小鼠150只，按体重随机分为5组：阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组、1/8LD<,50>组、1/4LD<,50>组、1/2LD<,50>组，给药5天(d)，分别在给药后第14、28、35、42和70d进行DFP的精子畸变实验。 3.DFP的排铝作用研究 3.1小鼠的排铝实验 健康昆明种小鼠84只，雌雄各半，22～24g，自由饮水和进食。随机分为6组：阴性对照组、荷铝对照组、预防组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，以灌胃方式给药。将小鼠以颈椎脱臼法处死，取其血清、肝、肾、脑和骨骼组织。用原子吸收分光光度法测定小鼠血清和各组织中的铝、铜、锌、钙、铁、镁含量。 3.2家兔排铝实验 3.2.1急性排铝实验 雄性新西兰大白兔24只，荷铝后随机分成荷铝对照组、低、中、高剂量组。将DFP的灭菌水溶液给低、中、高剂量组灌胃。收集尿液，待做元素铝及其他必需元素的测定。 3.2.2与维生素C(Ve)、美司那(Mesan)协同排铝作用 将24只新西兰大白兔随机分为荷铝组、DFP组、DFP+Vc组、DFP十美司那组。荷铝后依次灌胃给予灭菌无离子水、DFP、DFP+Vc、DFP+美司那。收集尿液，待做元素铝的测定。 3.2.3不同给药方式的排铝作用比较 18只新西兰大白兔随机分为荷铝对照组、灌胃组和注射组，荷铝后分别以灌胃和皮下注射方式给DFP。收集尿液，待做元素铝的测定。 3.2.4亚慢性排铝实验 新西兰大白兔16只，随机分为阴性对照组、荷铝对照组、DFP组。荷铝后DFP组用DFP溶液灌胃2周。分别于实验开始、染铝结束及给DFP结束时从兔耳静脉取血。第三次取血后，将兔处死，取肝、肾、脑、骨组织，待做血清及组织中铝及其他必需元素的测定。 4.DFP对荷铝动物的保护作用机制研究 4.1 对荷铝小鼠抗氧化系统的恢复作用 健康昆明种小鼠84只，雌雄各半，22～24g，自由饮水和进食。随机分为6组：阴性对照组、荷铝对照组、预防组、低、中、高剂量组，以灌胃方式给药。实验结束时，小鼠眼球取血及肝、肾、脑组织测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量。 4.2 DFP对慢性荷铝小鼠神经系统的保护作用 健康昆明种小鼠98只，雌雄各半，22-24g，自由饮水和进食。按体重随机分为7组，以灌胃方式给药，分组情况如下：阴性对照组、预防组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、荷铝组、盐酸吡硫醇对照组。 4.3 DFP对铝诱发小鼠遗传物质损伤的抑制作用 采用昆明种小鼠进行骨髓细胞微核实验和精子畸变实验。两种实验均随机分为5个剂量组：阴性对照组、阳性对照组、荷铝对照组、低剂量组和高剂量组。 4.4 DFP对荷铝动物肝肾功能的影响 Wistar大鼠AlCl<,3>染毒3周后分别给予不同剂量的DFP 1周，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活力及总蛋白、白蛋白、总胆红素和结合胆红素、肌酐、尿素氮、尿酸的含量。同时测定肝、肾组织中铝、锌、铜、铁、钙、镁等元素的含量。 [结论] 1.DFP一般合成分三步进行，步骤多，时间长，反应条件要求苛刻。本研究建立的一步合成法，缩短了时间，降低了成本，提高了收率。 2.DFP毒性低、排铝效果显著，同时对其它必需元素锌、镁、钙、铜、锰均无促排作用。 3.DFP能够改善荷铝小鼠的学习记忆能力。 4.DFP能拮抗铝诱发的中枢神经递质功能减退。 5.DFP对铝引起的凋亡相关蛋白改变有一定的调节作用。 6.DFP对铝诱发小鼠遗传物质损伤具有抑制作用。 7.DFP对荷铝动物肝、肾功能具有一定的保护作用。 总之，本研究建立了DFP新的合成方法；对DFP的毒性进行了评价；首次系统全面地对DFP的排铝效果以及对荷铝动物的保护作用机制进行了研究。为寻求一种价格低廉、安全有效的治疗铝中毒的药物提供了理论依据。 收起