摘要: 多年生黑麦草(Lolium perenne L.)是国内外广泛应用的重要冷季型禾草之一。利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。本研究以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)的三个品种：里加(Regal)、贝尔勒(Belle)、马拉松(Marathon)为研究对象，建立了... 展开 多年生黑麦草(Lolium perenne L.)是国内外广泛应用的重要冷季型禾草之一。利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。本研究以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)的三个品种：里加(Regal)、贝尔勒(Belle)、马拉松(Marathon)为研究对象，建立了高效的遗传转化体系，研究结果表明： (1) 建立了多年生黑麦草的再生体系。以多年生黑麦草的芽尖、根尖、下胚轴、成熟种子为外植体进行了愈伤组织诱导和分化的研究，通过不同处理结果的比较表明，不同划割处理的成熟种子的愈伤组织诱导率不同，不同外植体的愈伤组织诱导率也不同，芽尖、根尖愈伤组织的诱导效果较差，纵向划割的成熟种子的愈伤组织的诱导率及分化能力均优于下胚轴；2,4-D浓度在5-7 mg/L，6-BA浓度为0.05-0.1mg/L时有利于成熟种子和下胚轴诱导产生愈伤组织；在分化培养基中添加0.5-1.0mg/L6-BA对愈伤组织的分化效果较好；继代培养时间对愈伤组织的分化率有很大影响，成熟种子和下胚轴在继代培养基上继代培养60d和80d时分化率最高，继代天数过长不利于愈伤组织的生长。 (2) 农杆菌介导的多年生黑麦草遗传转化体系的建立与优化。通过对实验现象的观察和数据的统计分析表明，将预培养4d的黑麦草的胚性愈伤组织经OD600=0.6左右的农杆菌菌液在负压下浸染6min，共培养3d，用250mg/L的羧苄青霉素(Carb)来脱菌，附加150μmol/L的乙酰丁香酮(AS)，然后转接到含75mg/L的潮霉素的筛选培养基上进行筛选培养的转化体系效果最佳。 (3)目的基因AVP1的转化及对转基因植株的初步鉴定。将所得抗性愈伤组织转接到含250mg/L的羧苄青霉素和75mg/L的潮霉素的分化培养基上进行诱导分化，然后在1/2MS的生根培养基上使其再生成苗。最后，对转基因植株进行AVP1基因中间片段及全长的PCR检测，结果显示黑麦草三个品种均没有获得转基因植株。表明目的基因没有整合到多年生黑麦草基因组中。 收起