摘要: 目的：观察葛根素(Puerarin，Pue)和过氧化氢（H2O2)在体外对大鼠成骨细胞(osteoblast，OB)增殖、分化和矿化功能的影响，探讨Pue对H2O2诱导OB氧化损伤的保护作用。 方法：①多次酶消化法分离新生大鼠颅盖骨OB，观察细胞的形态、生物学特点及成骨特... 展开 目的：观察葛根素(Puerarin，Pue)和过氧化氢（H2O2)在体外对大鼠成骨细胞(osteoblast，OB)增殖、分化和矿化功能的影响，探讨Pue对H2O2诱导OB氧化损伤的保护作用。 方法：①多次酶消化法分离新生大鼠颅盖骨OB，观察细胞的形态、生物学特点及成骨特性，以碱性磷酸酶(ALP)化学染色、骨钙素(OCN)免疫组化染色等鉴定OB，采用第二代OB进行实验。②随机将细胞分为正常对照组、Pue(10-10～10-3mol/L，“P”)组和H2O2(10-9～10-3mol/L,“H”)组，应用MTT比色法分别观察第1～4d细胞的增殖，醌衍生物比色法检测诱导分化第2～8dALP的活性，茜素红染色法观察诱导分化第14d Pue组的矿化结节形成并计数。③用“P”预孵育OB 48h，加入0.1mmol/L H2O2(H')继续孵育24h[P+H’]；H’预孵育OB 24h，换“P”孵育48h[H’+P]，测定细胞的增殖与ALP活性。④先以10-5mol/LPue(P’)孵育OB 48h，再加入H’24h[P’+H’]后测定细胞内的微量丙二醛(mMDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)。 结果①与正常对照组相比，“P”组中10-8～10-5mol/L的MTT值(P<0.01)、ALP活性(P<0.01)和矿化结节的形成(P<0.05)均增加，且组间两两比较以10-6mol/L组增加更明显(P<0.01)。 MTT值在第1～4d均升高，其中第3d升高最为明显(P<0.01)，ALP活性的增加主要出现在诱导分化第2d和第4d(P<0.01)；Pue10-4mol/L组在第2d MTT值升高，诱导分化第4d ALP活性增加(P<0.01)，第14d矿化结节数无差异(P>0.05)；Pue10-3mol/L组仅在第1d MTT值减少(P<0.05)，第2d和4dALP活性降低(P<0.01)，第14d矿化结节形成减少(P<0.05)。②H2O2在低浓度(1×10-8～6×10-5mol/L)时，MTr值(P<0.05)、ALP活性(P<0.001)较正常对照组明显升高；在高浓度(1×10-4～1×10-3mol/L)时MTI值、ALP活性明显降低(P<0.001)，以0.1mmol/L最显著(P<0.001).在观察期间H2O2对OB MTT值和ALP活性均有影响，分别在孵育第3d和诱导分化第6d影响最显著(P<0.001).③与H'组比较，“P+H”和“H'+P”组中10-7～10-4mol/LPue使受损OB的MTT值升高(P<0.01)；10-8～10-4mol/L使ALP活性增加(P<0.001)，都以10-5mol/L影响更为显著(P<0.001)，且损伤前加入Pue能起到更好的保护作用(P<0.001)。④与正常对照组相比，H’组的mMDA含量显著增加而SOD活性和T-AOC显著降低(P<0.01)；Pue使受损OB的mMDA含量显著减少(P<0.01)，而SOD活性(P<0.01)和T-AOC(P<0.05)则显著增强，但仍不能使mMDA含量(P<0.01)、SOD活性(P>0.05)和T-AOC(P<0.01)恢复正常。结论①Pue和H2O2对OB的增殖与分化的调节存在双向性。②Pue在体外对H2O2介导OB的氧化损伤具有保护作用。 收起