摘要: 目的：非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)对多种肿瘤如肠癌、乳腺癌、肺癌等具有抗肿瘤作用，研究表明通过环氧化酶(cyclooxygenase，COXs)依赖机制和非COXs依赖机制起作用。本研究通过体外培养人Burkitt's淋巴瘤细胞系R... 展开 目的：非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)对多种肿瘤如肠癌、乳腺癌、肺癌等具有抗肿瘤作用，研究表明通过环氧化酶(cyclooxygenase，COXs)依赖机制和非COXs依赖机制起作用。本研究通过体外培养人Burkitt's淋巴瘤细胞系Raji细胞株，观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对Raji细胞增殖、凋亡、凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达水平的影响，探讨联合应用阿霉素(adriamycin，ADM)对Raji细胞增殖、凋亡的影响及相关机制。 方法：体外培养Raji细胞，分为对照组，塞来昔布组，阿霉素组，塞来昔布+阿霉素组。光镜下观察瑞氏染色后细胞形态变化，应用噻唑蓝(MTT)还原法检测细胞增殖率，用流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡率，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测caspase-9 mRNA表达，细胞免疫组化法测caspase-9蛋白表达。统计分析采用SPSS13.0软件。所有数据用均数±标准差表示，P<0.05认为差别有统计学意义。 结果：光镜下可见塞来昔布处理的细胞有凋亡改变。单独应用0.1μg/ml阿霉素处理24h细胞的增殖率为(93.41±3.16)％，不同浓度的塞来昔布(20、40、60、80、100μmol/L)处理24h细胞的增殖率分别为(93.56±2.08)％，(86.16±2.27)％，(63.92±3.17)％，(23.21±2.35)％，(18.27±1.36)％；均较对照组降低(P<0.05)。塞来昔布+阿霉素组细胞24h的增殖率分别为：(80.58±1.95)％，(64.28±1.55)％，(41.62±1.79)％，(12.64±2.45)％，0；与单独应用二药相比明显降低细胞的增殖率(P<0.05)。 流式细胞仪检测显示对照组细胞24h凋亡率为(3.50±1.18)％，应用塞来昔布(20、40、60、80、100μmol/L)24h分别为(5.01±0.80)％，(14.00±1.68)％，(34.33±4.47)％，(57.63±2.27)％，(67.50±2.00％)；除20μmol/L组外，与对照组相比，均有升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素，60μM塞来昔布+0.1μg/ml阿霉素分别作用Raji细胞24h，细胞凋亡率分别为(7.62±1.23)％，(48.07±2.32)％，60μM塞来昔布+0.1μg/ml阿霉素与单独用药相比，凋亡率有升高(P<0.05)。 对照组24h无caspase-9 mRNA表达。塞来昔布组细胞24h后caspase-9 mRNA表达分别为0.13±0.04，0.23±0.02，0.34±0.14，0.48±0.04，0.60±0.01；与对照组相比表达均上调(P<0.05)。塞来昔布60μM处理Raji细胞48h，72h细胞caspase-9 mRNA表达分别为0.41±0.14，0.51±0.01，和24h相比显著升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素作用Raji细胞24hCaspase-9 mRNA表达为0.09±0.03。60μM塞来昔布联合0.1μg/ml阿霉素作用Raft细胞24h后，Caspase-9 mRNA表达为0.47±0.02，较单用二药表达升高(P<0.05)。 对照组细胞24h无caspase-9蛋白表达。塞来昔布处Raji细胞24小时后caspase-9蛋白表达分别为(6.75±1.57)％，(19.00±1.41)％，(26.00±1.41)％(38.50±2.12)％，(52.00±2.83)％，与对照组相比均升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素作用Raji细胞24h，Caspase-9蛋白表达为(6.23±1.12)％。60μM塞来昔布联合0.1μg//ml阿霉素作用Raji细胞24h后，Caspase-9蛋白表达为(37.50±3.54)％，高于使用单药(P<0.05)。 结论： 1.塞来昔布在20μM～100μM浓度范围内，能抑制Raji细胞增殖，并呈剂量和时间依赖性； 2.塞来昔布可诱导Raji细胞凋亡，有剂量依赖性，并增强caspase-9的表达； 3.塞来昔布联合阿霉素能增强对Raji细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用。 收起