摘要: 人核糖核酸酶抑制因子(Human Ribonuclease Inhibitor，hRI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白，分子量为50kD，其基因位于染色体11p15.5，三级结构呈对称的马蹄型。hRI是核糖核酸酶A(Ribonuclcase A，RNase A)的抑制剂，可以有效地抑制其... 展开 人核糖核酸酶抑制因子(Human Ribonuclease Inhibitor，hRI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白，分子量为50kD，其基因位于染色体11p15.5，三级结构呈对称的马蹄型。hRI是核糖核酸酶A(Ribonuclcase A，RNase A)的抑制剂，可以有效地抑制其对RNA的水解作用。血管生成因子(Angiogenin,Ang)属RNase A超家族成员。根据cDNA序列分析，Ang与RNase A有35％的同源性。hRI能与Ang以1：1的化学剂量紧密结合(Ki=7.1× 10-16M)。动物实验进一步证实，hRI具有抑制动物体内移植瘤生长的作用。本实验室前期已进行了大量的工作，我们从人胎盘和猪肝中提取hRI，给予荷瘤小鼠后可以抑制乳腺癌实体瘤Ca761，肉瘤S180的生长。 从组织中提取的该蛋白产量较少，成本高，不宜大批量生产，生产工艺复杂，化学性质不稳定，生物半衰期短，成为其临床应用的瓶颈。本试验针对其特点，给单体RI蛋白加上谷胱甘肽转移酶(GST)标签，构建成融合表达蛋白(GST-hRI)，并将二者进行对比。结果发现融合蛋白(GST-hRI)无论在活性保持，半衰期延长方面都有显著提高；探索最优条件下融合蛋白(GST-hRI)的可溶性表达及其生物学作用。同时将上述纯化的GST-hRI用于动物实验，将BALB/C小鼠接种肝癌H22后，用该蛋白质进行处理。通过荷瘤小鼠抑瘤实验结果表明，治疗组的血管计数、肿瘤大小及恶性程度与空白组有显著差异。同时融合蛋白(GST-hRI)和RI组两种蛋白之间疗效上也有差异。将七天龄鸡胚分别施以GST-RI和hRI以检测其生物学作用，结果发现两者明显抑制鸡胚血管生成，并存在差异。 收起