摘要: 目的：观察一定浓度的氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL，Oxidatirely Modified Low Density Lipoprotein)干预在成骨诱导剂存在或不存在两种条件下，对与平滑肌细胞(SMCs，Smooth muscle cells)共培养中骨髓间充质干细胞(MSCs，Mesenchymal StemCells)增殖... 展开 目的：观察一定浓度的氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL，Oxidatirely Modified Low Density Lipoprotein)干预在成骨诱导剂存在或不存在两种条件下，对与平滑肌细胞(SMCs，Smooth muscle cells)共培养中骨髓间充质干细胞(MSCs，Mesenchymal StemCells)增殖与成骨分化的影响，进而来阐释干细胞参与动脉粥样硬化(AS，atherosclerosis)形成的机制。方法：实验干预因素有两个：成骨诱导剂(简称诱导剂)和OX-LDI。以析因设计分为4组：联合干预组(诱导剂及ox-LDL);ox-LDL组；诱导剂组；普通组。四组均为在DMEM培养液中通过插入式培养皿间接共培养MSCs和SMCs两种细胞，插入式培养皿的底部为细胞因子可自由通过的半透膜。通过MTI、法测培养Od、4d、7d、10d、14d五个时间点各组MSCs细胞数量，绘制细胞生长曲线；采用逆转录酶链式反应检测培养7d时MSCs内骨桥蛋白(OPN，Osteopontin)mRNA的表达量；第10d检测细胞内碱性磷酸酶(AKP，Alkaline phosphatase)活性；14d免疫组化法测定MSCs内OPN及AKP的表达。结果：细胞生长曲线显示4组MSCs细胞数量均随培养时间的延长而增加，1到3d为潜伏期，4到7d为对数生长期，7到10d进入平台期，10d后进入凋亡期。0d时，OX-LDL与诱导剂两因素及其交互作用均无统计学意义；说明干预开始前各组细胞数量均等；和普通组相比ox-LDL促进MSCs增殖(7d，P<0．05)；诱导剂，两因素联合作用抑制细胞增殖(4～14d，P<0．05)。7d时4组MSCs均表达OPN mRNA，10d时4组均表达AKP，其中联合组表达OPN和AKP最强，统计学处理显示ox-LDL和诱导剂对于促进MSCs表达OPN及AKP具有正交互作用(P<0．05)。14d时细胞爬片经免疫组化染色显示联合组OPN及．AKP阳性表达最强。结论：SMCs与MSCs间接共培养条件下，ox-LDL促进MSCs增殖，诱导MSCs成骨作用微弱；诱导剂抑制MSCs增殖促进MSCs成骨分化；而ox-LDL和诱导剂共同作用明显抑制MSCs增殖促进MSCs成骨分化，有协同作用。推测这可能成为体内血管动脉粥样硬化异位钙化形成的机制之一。 收起