摘要: 目的：采用悬浮培养方法分离、培养胚胎大鼠海马NSCs并鉴定，探讨RA与NGF联合应用对胚胎大鼠海马NSCs向神经元分化的作用。 方法：取胚龄13.5天SD大鼠的胚胎分离海马组织，经0.25％胰蛋白酶消化，获得NSCs进行原代培养。比较三种培养方法(无血清悬... 展开 目的：采用悬浮培养方法分离、培养胚胎大鼠海马NSCs并鉴定，探讨RA与NGF联合应用对胚胎大鼠海马NSCs向神经元分化的作用。 方法：取胚龄13.5天SD大鼠的胚胎分离海马组织，经0.25％胰蛋白酶消化，获得NSCs进行原代培养。比较三种培养方法(无血清悬浮培养、含血清培养、饲细胞培养)对细胞团形成情况的影响。比较两种不同的分散方法(单纯机械吹打、常规胰蛋白酶消化)对NSCs传代后细胞团形成情况的影响。利用免疫组织化学方法鉴定所培养的原代和传代细胞。应用免疫组织化学方法观察常规贴壁分化、RA诱导、NGF诱导以及RA+NGF联合诱导对NSCs分化的影响。应用SPSS12.0软件经单因素方差分析对结果进行显著性检验。 结果：①NSCs在无血清悬浮培养条件下呈克隆状态生长。含血清培养和饲养层细胞培养条件下NSCs快速贴壁分化。②单纯机械吹打分散与常规胰蛋白酶消化比较，前者可以达到分散目的且不影响传代后细胞的增殖能力。③原代和传代培养的神经细胞球经过免疫组织化学检测其中绝大多数细胞nestin蛋白反应呈阳性。④NSCs常规贴壁分化培养主要向神经胶质细胞分化，加入诱导剂RA后NSCs向神经元分化的比例对比常规贴壁分化提高了近一倍。NGF诱导与常规贴壁分化培养组比较没有显著性差异。NGF与RA联合作用组对于NSCs向神经元分化的作用与RA作用组没有显著性差异，但是分化后的神经元发育更加成熟。 结论：从大鼠胚胎脑海马组织中分离得到可自我复制和多向分化的NSCs。诱导剂RA可以增加其向神经元方向分化的比例，NGF和RA联合诱导不能提高NSCs向神经元分化的比例，但是NGF能促进分化后所得神经元的发育和存活。 收起