摘要: 第一部分Aβ诱导THP-1单核细胞的上清致SK-N-SH神经细胞损伤模型的建立 目的：掌握THP-1单核细胞和SK-N-SH神经细胞的生长特征，建立Aβ1-40诱导THP-1细胞激活对SK-N-SH神经细胞系损伤的细胞模型。 方法：用相差显微镜观察THP-1和SK-N-SH细胞的形... 展开 第一部分Aβ诱导THP-1单核细胞的上清致SK-N-SH神经细胞损伤模型的建立 目的：掌握THP-1单核细胞和SK-N-SH神经细胞的生长特征，建立Aβ1-40诱导THP-1细胞激活对SK-N-SH神经细胞系损伤的细胞模型。 方法：用相差显微镜观察THP-1和SK-N-SH细胞的形态，用MTT比色法绘制SK-N-SH细胞的生长曲线。用乳酸脱氢酶(LDH)漏出率观察SK-N-SH细胞的损伤程度。 结果：THP-1细胞呈圆形或椭圆形，悬浮生长。SK-N-SH细胞呈锥形或梭形，有明显的突起。Aβ可激活THP-1细胞，激活后THP-1的上清对神经细胞系SK-N-SH有损伤作用，在2小时Aβ诱导THP-1细胞的上清对SK-N-SH细胞的损伤最明显。人参皂甙与THP-1细胞预孵育30分钟可明显减轻神经细胞的损伤。 结论：THP-1细胞可以模拟小胶质细胞模型；Aβ1-40诱导THP-1细胞可以作为炎症损伤的细胞模型。 第二部分Aβ诱导THP-1单核细胞信号转导激酶的激活和炎性细胞因子的表达及人参皂甙的作用 目的：研究Aβ诱导THP-1细胞信号转导的激酶激活与炎性细胞因子表达之间的关系，以及人参皂甙的作用机理。 方法：使用八种不同的激酶抑制剂作为工具药及人参皂甙观察对THP-1细胞信号转导通路的不同激酶和炎性细胞因子的作用，分析它们之间的关系。用放射免疫法测定THP-1细胞上清中炎性细胞因子IL-1β、IL-8和TNFα的浓度，用免疫印迹法测定THP-1细胞磷酸化ERK、磷酸化PTK、c-Jun和c-Fos的表达。 结果：用Aβ1-40(125nM)与THP-1细胞孵育2小时，可引起THP-1细胞表达IL-1β、IL-8和TNFα增高。用工具药Genistein(酪氨酸蛋白激酶抑制剂)、PD98059[有丝裂原活化的ERK激活激酶(MEK)抑制剂]、U0126(MEK1/2抑制剂)预处理可以抑制Aβ诱导THP-1细胞表达IL-1β、IL-8和TNFα；用工具药GW5074(c-Raf抑制剂)预处理可部分抑制Aβ诱导THP-1细胞表达IL-1β和TNFα，但不能抑制IL-8的表达；用工具药SP600125(JNK抑制剂)预处理可以部分抑制Aβ诱导THP-1细胞表达IL-1β、TNFα和IL-8；用工具药Wortmannin(PI3K抑制剂)、GF109203X(PKC抑制剂)和SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理不能抑制Aβ诱导THP-1细胞表达IL-1β、TNFα和IL-8。人参皂甙与THP-1细胞预孵育30分钟，再用Aβ1-40(125nM)与THP-1细胞孵育2小时，人参皂甙可以抑制THP-1细胞炎性细胞因子的分泌，并且有剂量依赖关系。 结论：Aβ诱导THP-1细胞IL-1β、TNFα和IL-8的表达与RTPK、c-Raf、ERK-1/2、c-JNK、c-Jun和c-Fos的激活或表达增高密切相关，而与p38MAPK、PI3激酶和PKC无关。RTPK、c-Raf、ERK-1/2、c-JNK、c-Jun和c-Fos可能是减轻AD炎症反应潜在的作用靶点。人参皂甙可以通过抑制ERK-1/2磷酸化、c-Jun和c-Fos的表达减少细胞因子的表达，人参皂甙可能作为一种新的AD治疗药物。 第三部分Aβ诱导THP-1细胞的炎性反应上清对神经细胞凋亡的影响及人参皂甙的干预 目的：研究Aβ诱导THP-1细胞的炎性上清导致SK-N-SH神经细胞凋亡的机理以及人参皂甙抗凋亡的作用机理。 方法：将Aβ1-40诱导THP-1细胞的炎性上清加入到SK-N-SH神经细胞培养中。用免疫印迹法测定磷酸化p38MAPK、磷酸化Tau蛋白、突触体素、Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达；用免疫组织化学方法检测MAP-2的表达；用Tunel法检测SK-N-SH细胞凋亡。 结果：Aβ1-40诱导THP-1细胞的炎性上清可引起SK-N-SH神经细胞磷酸化p38MAPK、磷酸化Tau蛋白、Caspase-3和Bax的表达增强，突触体素、MAP-2和Bcl-2表达下降，凋亡细胞增加；人参皂甙预处理THP-1细胞与不加药物的模型组相比，可见磷酸化p38MAPK、磷酸化Tau蛋白、Caspase-3和Bax的表达降低，突触体素、MAP-2和Bcl-2表达增强，凋亡细胞减少。 结论：Aβ1-40激活的THP-1细胞可通过增高神经细胞p38MAPK、Tau的磷酸化和减少突触体素的表达，促进AD神经元纤维缠结、突触减少和神经细胞凋亡。人参皂甙可以抑制Aβ所引起的上述变化，可能是一种有前途的治疗AD的药物。 第四部分Aβ诱导THP-1细胞COX-2、一氧化氮合酶和一氧化氮的变化及人参皂甙的干预 目的:研究人参皂甙对Aβ诱导THP-1细胞表达环加氧酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和一氧化氮(NO)的影响。 方法:用免疫印迹法测定THP-1细胞表达COX-2和iNOS，用Griess法测定细胞上清中NO的浓度。 结果:Aβ1-40与THP-1细胞共孵育24小时的模型组COX-2和iNOS的表达明显高于对照组；与模型组比较，人参皂甙可明显抑制THP-1细胞COX-2和iNOS的表达，减少NO的产生。 结论:人参皂甙可以抑制Aβ诱导THP-1细胞表达COX-2和iNOS，减轻对神经元的损伤。 收起