摘要: 该研究以若干已知具有重要功能的基因的cDNA为信息探针,采用"同源筛选"的策略进行基因克隆,分离和鉴定了5个分别与转录调控、信号传导、蛋白修饰及非特异性免疫等功能相关的人类新基因.该研究以人溶菌酶LYZ基因作为信息探针,克隆了一个和人LYZ有一定同... 展开 该研究以若干已知具有重要功能的基因的cDNA为信息探针,采用"同源筛选"的策略进行基因克隆,分离和鉴定了5个分别与转录调控、信号传导、蛋白修饰及非特异性免疫等功能相关的人类新基因.该研究以人溶菌酶LYZ基因作为信息探针,克隆了一个和人LYZ有一定同源性的基因,长805bp该基因的ORF长441bp,编码146个氨基酸残基,信号肽分析显示其N端18个氨基酸为分泌信号肽.我们在这项研究中克隆了一个人溶菌同源蛋白3(LYZ3),为了进一步研究其功能,将它和人C型溶菌酶基因LYZ分别在Pichia酵母中进行重组表达.为有效分泌目的蛋白,将除去自身信号肽的LYZ3,天然型人LYZ,以及根据酵母密码子偏爱性重新设计并人工合成的天然型溶菌酶基因片段分别装入分泌型酵母载体pPIC9.基于在LYZ3基因发酵上清中检测到的溶菌活性,以及它和C型溶菌酶酶基因具有一定的同源性,尤其是决定LYZ3空间结构的8个Cys的位置与LYZ的8个Cys的位置是完全一致的,可以推测LYZ3可能属于C型溶菌酶基因家族成员,但其最适底物和反应条件与已知的人溶菌酶基因LYZ可能有所不同.我们将对其最适底物和具体功能作进一步的探讨. 收起